FITC-Dextran Feeding: Eine Methode zur Quantifizierung der Darmdurchlässigkeit in C. elegans

Abstract

Quelle: Le, T. A. N., et al. Messung der Auswirkungen von Bakterien und Chemikalien auf die Darmdurchlässigkeit von Caenorhabditis elegans. J. Vis. (2019). 

Dieses Video stellt eine Methode zur Visualisierung und Messung der Integrität des C. elegans Darmlumendurchfütterer durch Fütterung von Würmern mit FITC-beschrifteter Dextran vor.  Das Beispielprotokoll zeigt den Assay mit 3,3′-Diindolylmethan (DIM)-behandelten und pathogen gefütterten Würmern.

Protocol

Dieses Protokoll ist ein Auszug aus Le et al, Messung der Auswirkungen von Bakterien und Chemikalien auf die Darmdurchlässigkeit von Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2019). Herstellung von NGM-Platten zur Prüfung der Auswirkungen einer Chemikalie (DIM) auf…

Representative Results

Abbildung 1: Die Wirkung von DIM auf die Darmdurchlässigkeit von C. elegans gefüttert P. aeruginosa. Mikroskopiebilder von Würmern aus (A) E. coli OP50 ohne FITC-dextran Fütterung, (B) E. coli mit FITC-dextran Fütterung, (C) P. aeruginosa</…

Materials

3,3’-diindolylmethane	Sigma	D9568
90×15 mm Petri dishes	SPL Life Sciences, South Korea	10090
Bactor Agar	Beckton Dickinson	REF. 214010
Formaldehyde solution	Sigma	F1635
Caenorhabditis elegans N2	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)		Wild type
Cholesterol	Sigma	C3045
Costa Assay Plate, 96 Well Black With Clear Flat Bottom Non-treated, No Lid Polystyrene	Corning Incorporated	REF. 3631
Dimethyl sulfoxide	Sigma	D2650
Escherichia coli OP50	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)
Fluorescein isothiocyanate – dextran	Sigma	FD10S
Harmony software	PerkinElmer		verson 3.5
Magnesium sulfate heptahydrate	Fisher Bioreagents	BP2213-1
Fluoromount aqueous mounting medium	Sigma	F4680
Operetta CLS High-Content Analysis System	PerkinElmer	HH16000000
Peptone	Merck	EMD 1.07213.1000
Pseudomonas aeruginosa PA01	Korean Collection for Type Culture	KCTC NO. 1637
Sodium Chloride	Fisher Bioreagents	BP358-1
Stereo Microscope	Nikon, Japan	SMZ800N