연쇄상 구균 치료: 타입-1 당뇨병 멜리투스의 제브라피시 모델

Overview

이 비디오는 당뇨병 합병증과 대사 기억의 병리생리학을 연구하기 위해 약물 연쇄토조신의 도움으로 제1형 당뇨병을 위한 제브라피시 모델을 만드는 기술을 설명합니다.

Protocol

1. 당뇨병을 가진 제브라피쉬 세대, DM 물고기

1. 복구 및 마취 수탱크를 모두 준비합니다. 회수물은 정상적인 어수량입니다. 마취용 물의 경우 2-페녹시에탄올을 충분히 첨가하여 일반 어수질에서 1:1,000 희석을 달성합니다.
2. 0.09% 염화나트륨 2ml에 STZ 6 mg을 첨가하여 연쇄토조신(STZ)의 0.3% 용액(연기 후드)을 준비하고 즉시 얼음에 용액을 놓는다. 이것은 20 분에 대략 20 물고기의 주입을 위한 충분한 주입 해결책을 제공할 것입니다. 20분 마크를 초과하는 경우 중지하고 진행하기 전에 새로운 STZ 솔루션을 만듭니다. 별도의 튜브 알리쿼트에서 물고기를 제어하기에 충분한 식염수 솔루션. STZ가 용해되면 모든 후속 단계는 연기 후드 사용을 필요로하지 않습니다.
3. STZ 또는 제어 용액으로 27 1/2 게이지 바늘이 장착된 1/2 cc 주사기를 채우면 기포가 갇히지 않도록 합니다.
4. 물고기를 마취물에 배치하여 각 물고기를 개별적으로 마취하고 수영 운동이 중단 될 때까지 기다립니다 (1-2 분).
5. 마취가 잠시 종이 타월에 물고기를 놓아 여분의 물을 흡수하면 물고기를 계량 보트에 놓고 물고기의 질량을 측정하십시오.
6. 물고기를 단단한 표면(페트리 접시 뚜껑)에 놓습니다.
7. STZ 또는 제어 용액을 배꼽을 지나 배꼽을 복부 복막의 후면 측면에 삽입하여 물고기의 복막 구멍에 주입한다.
8. STZ의 0.35 mg/g(350 mg/kg)는 각 물고기에게 전달되어야 하며 필요한 0.3% 용액의 부피는 다음과 같은 방식으로 계산될 수 있다.
   1. 필요한 mg에서 STZ의 양을 산출하기 위해 물고기 (g)의 질량을 0.35로 곱합니다.
   2. 상기 에서 생성된 제품을 3으로 나누어 분화에 필요한 0.3% 용액의 부피를 산출한다.
      샘플: 0.5 g 물고기 : a) 0.5 x 0.35 = 0.175 b) .0175 /3 = 0.058 ml = 58 μl.
      STZ가 없는 동일한 부피는 대조군 물고기를 위해 주입될 것입니다. 물고기 질량당 주입하는 볼륨시트를 생성하고 빠른 참조를 위해 사용해야 합니다.
9. 주사 후 복구 물 탱크에 물고기를 배치하고 정상적인 수영 활동을 모니터링합니다. 일단 이 것을 달성하면 물고기는 22°C-24°C의 감소된 온도 범위에서 유지되는 정상 생활 탱크로 옮겨질 것이다. 이 감소 된 온도는 고혈당증 (당뇨병 mellitus, DM)의 효율적인 유도에 매우 중요합니다.
10. 고혈당증은 첫 번째 주사의 24 시간 이내에 검출되지만, 제브라피쉬는 아래와 같이 주간 유지 보수 주사를 선행하여 빈번한 주입 유도 단계가 필요합니다.

주 1: 3 주사 (일 1, 3, 5), 주 2: 1 주사 (일 12), 주 3: 1 주사 (일 19), 주 4: (일 21) 관심의 분석 수행.

이 시점에서 제브라피쉬는 고혈당증의 장기간 상태에 있는 것으로 간주되고 망막증, 신장병증 및 또한 손상된 지느러미 재생의 당뇨병 합병증을 전시합니다. 이들은 DM 물고기라고합니다. 추가적으로 원하는 경우에 물고기는 주간 유지 보수 주사와 고혈당 상태에서 유지 될 수 있습니다. 이 과정에서 약 5%의 사망이 예상되어야 합니다.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Streptozocin	Sigma Aldrich	S0130
2 phenoxyethanol	Sigma Aldrich	P1126
Scalpel (size 10)	Fisher Scientific	089275A
Petri Dishes	Fisher Scientific	08-757-13
½ cc syringe, with 27 1/2 gauge needle	Fisher Scientific	305620
Sodium Chloride	Sigma Aldrich	S3014
Dissecting Microscope	Nikon	TMZ-1500	Any dissecting microscope is fine.