علاج ستريبتوسوسين: نموذج حمار وحشي من النوع 1 مرض السكري Mellitus

Overview

يصف هذا الفيديو تقنية إنشاء نموذج حمار وحشي لمرض السكري من النوع 1 بمساعدة دواء Streptozocin ، لدراسة الفيزيولوجيا المرضية لمضاعفات السكري والذاكرة الأيضية.

Protocol

1. جيل من حمار وحشي مع مرض السكري، DM الأسماك

1. إعداد كل من خزانات المياه الانتعاش والتخدير. المياه الانتعاش هو مياه الأسماك العادية. للمياه مخدر إضافة ما يكفي من 2-phenoxyethanol بحيث يتم تحقيق تخفيف 1:1,000 في مياه الأسماك العادية.
2. إعداد حل 0.3٪ (في غطاء الدخان) من الستريبتوسوسين (STZ) عن طريق إضافة 6 ملغ من STZ إلى 2 مل من كلوريد الصوديوم 0.09٪ ووضع الحل على الفور على الجليد . وهذا سيوفر ما يكفي من محلول الحقن لحقن ما يقرب من 20 سمكة في 20 دقيقة. إذا تجاوزت علامة ال 20 دقيقة، فتوقف، واصنع حلا جديدا ل STZ قبل المتابعة. في أنبوب منفصل aliquot ما يكفي من محلول ملحي للسيطرة على الأسماك. مرة واحدة هو solubilized STZ جميع الخطوات اللاحقة لا تتطلب استخدام غطاء محرك الدخان.
3. املأ حقنة 1/2 سم مكعب مجهزة بإبرة قياس 27 1/2 مع STZ أو حلول التحكم لضمان عدم محاصرة فقاعات الهواء.
4. تخدير كل سمكة على حدة عن طريق وضع الأسماك في الماء المخدر، والانتظار حتى تتوقف حركة السباحة الخاصة بهم (1-2 دقيقة).
5. مرة واحدة تخدير لفترة وجيزة وضع الأسماك على منشفة ورقية لامتصاص أي المياه الزائدة، ووضع الأسماك في قارب الوزن وقياس كتلة الأسماك.
6. ضع السمك على سطح ثابت (غطاء طبق بيتري) للحقن.
7. حقن STZ أو حل التحكم في تجويف الصفاق من الأسماك عن طريق إدخال الإبرة الماضي شطبة في الجانب الخلفي من الصفاق البطني.
8. 0.35 ملغم/غرام (350 ملغم/كغ) من STZ يجب تسليمها إلى كل سمكة، ويمكن حساب حجم الحل المطلوب بنسبة 0.3٪ بالطريقة التالية.
   1. ضرب كتلة من الأسماك (ز) بنسبة 0.35 لتسفر عن كمية STZ في ملغ المطلوبة.
   2. تقسيم المنتج المتولد أعلاه بنسبة 3 لتسفر عن حجم الحل 0.3٪ المطلوبة للحقن في ميكرولتر.
      عينة: لسمكة 0.5 غرام : أ) 0.5 × 0.35 = 0.175 ب) .0175/3 = 0.058 مل = 58 ميكرولتر.
      نفس الحجم بدون STZ سيتم حقنه لسمكة التحكم. وينبغي إنشاء ورقة لأحجام لحقن كل كتلة سمكة واستخدامها للرجوع إليها بسرعة.
9. بعد حقن وضع الأسماك في خزان المياه الانتعاش ومراقبتها لنشاط السباحة العادي. وبمجرد تحقيق ذلك يتم نقل الأسماك إلى خزان المعيشة العادية التي يتم الحفاظ عليها في نطاق درجة حرارة منخفضة من 22 درجة مئوية - 24 درجة مئوية. هذا انخفاض درجة الحرارة أمر بالغ الأهمية لتحريض كفاءة من ارتفاع السكر في الدم (مرض السكري، DM).
10. على الرغم من أن يتم الكشف عن ارتفاع السكر في الدم في غضون 24 ساعة من الحقن الأول, من أجل الحث على حالة طويلة من ارتفاع السكر في الدم عالية جدا حمار وحشي تتطلب مرحلة التعريفي حقن متكررة تليها حقن الصيانة الأسبوعية كما هو مبين أدناه.

الأسبوع الأول: 3 حقن (اليوم 1، 3، 5)، الأسبوع 2: حقنة واحدة (اليوم 12)، الأسبوع 3: حقنة واحدة (اليوم 19)، الأسبوع الرابع: (اليوم 21) إجراء فحص الاهتمام.

عند هذه النقطة تعتبر حمار وحشي أن يكون في حالة طويلة من ارتفاع السكر في الدم وتظهر مضاعفات السكري من اعتلال الشبكية, اعتلال الكلية وأيضا ضعف تجديد الزعنفة. ويشار إلى هذه الأسماك DM. بالإضافة إلى ذلك إذا رغبت يمكن الحفاظ على الأسماك في حالة فرط السكر في الدم مع حقن الصيانة الأسبوعية. وينبغي توقع وفاة ما يقرب من 5٪ خلال هذه العملية.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Streptozocin	Sigma Aldrich	S0130
2 phenoxyethanol	Sigma Aldrich	P1126
Scalpel (size 10)	Fisher Scientific	089275A
Petri Dishes	Fisher Scientific	08-757-13
½ cc syringe, with 27 1/2 gauge needle	Fisher Scientific	305620
Sodium Chloride	Sigma Aldrich	S3014
Dissecting Microscope	Nikon	TMZ-1500	Any dissecting microscope is fine.