Targeting von Deep Brain Strukturen mit Mikroinjektionen für die Lieferung von Drogen, virale Vektoren oder Zelltransplantaten
Summary
In diesem Artikel zeigen wir eine Methode zur Glaskapillare Nadeln mit einem 50-um Lumen zu machen. Diese Technik reduziert die Schädigungen des Gehirns, minimiert passive Verbreitung von Drogen und ermöglicht eine genaue Ausrichtung in die Nager Gehirn.
Abstract
Mikroinjektionen in das Hirnparenchym sind wichtige Verfahren, die Drogen, virale Vektoren oder Zelltransplantaten liefern. Die Hirnverletzung, dass eine Injektionsnadel produziert während ihrer Flugbahn ist ein wichtiges Anliegen vor allem im Gehirn der Maus nicht nur für das Gehirn ist klein, aber manchmal auch mehrere Injektionen erforderlich sind. Wir zeigen hier eine Methode zur Glaskapillare Nadeln mit einem 50-Lumen um die erheblich reduziert die Hirnschäden und ermöglicht eine genaue Ausrichtung in die Nager Gehirn zu produzieren. Diese Methode erlaubt eine Lieferung von kleinen Mengen (20 bis 100 nl), reduziert Blutungen Risiken und minimiert passive Verbreitung von Drogen in das Hirnparenchym. Durch die Verwendung unterschiedlicher Größe der Kapillare Glasröhren oder dem Wechseln der Nadel Lumen, können verschiedene Arten von Substanzen und Zellen injiziert werden. Mikroinjektionen mit einer Glaskapillare eine erhebliche Verbesserung in Injektionstechniken und Tiefenhirnstimulation Targeting mit minimalen Kollateralschäden in kleinen Nagern.
Protocol
Discussion
Die Methode zeigte in diesem Video ist sehr nützlich für die meisten Medikamente oder viralen Vektoren in sehr genauen Orte in das Gehirn liefern. Einige der wichtigsten Vorteile dieser Technik sind die Zuverlässigkeit der Targeting-Punkt, die Richtigkeit der Injektionen und die geringe Größe der Hirnschädigung und Darm-Trakt Schaden 1, 2, 5, 6. Sobald die Technik ist standardisiert Bereich von mistargeting sollte 50 um oder weniger 1, 2. Zelltransplantate kann auch mit weiteren, 100-150 um <…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
OG-P wurde durch CONACyT s zu gewähren (CB-2008 bis 101476) und FRABA (686/10) unterstützt. AQ-H durch das National Institute of Health, der Howard Hughes Medical Institute, der Robert Wood Johnson Foundation und der Maryland Stem Cell Foundation unterstützt.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Capillary glass tube | Wiretrol I | 5-000-1001 | ||
| Micropipette puller | Kopf | Model 730 | ||
| Microforge | World Precision Instruments | Model 48000 | ||
| Mineral oil | MSDS | M7700 | ||
| High-vacuum grease | Dow Corning | 05054-AB | ||
| Anesthesia: 2.5% Avertin | 2,2,2-tribromoethanol + tert-amyl alcohol, 1:1 w/v | |||
| Heater pad | Mastex | Model 900 | ||
| Stereotactic device | Kopf | Model Kopf-900 | ||
| Surgical scalpel blade # 15 | Medi-Cut | |||
| Micro driller | Ideal Micro Drill | 67-1000 | ||
| Fine forceps | Fine Scientific Tools | |||
| 1-μL Micropipette | Rainin | |||
| Parafilm M. | ||||
| Surgical microscope | Zeiss | Vasiorkop with Contraves system | ||
| Microinjector | Narishige | Model MO-10 |
References
- Menn, B. Origin of oligodendrocytes in the subventricular zone of the adult brain. J Neurosci. 26, 7907-7918 (2006).
- Gonzalez-Perez, O., Romero-Rodriguez, R., Soriano-Navarro, M., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. Epidermal Growth Factor Induces the Progeny of Subventricular Zone Type B Cells to Migrate and Differentiate into Oligodendrocytes. Stem Cells. 27, 2032-2043 (2009).
- Hall, S. M. Some aspects of remyelination after demyelination produced by the intraneural injection of lysophosphatidyl choline. J Cell Sci. 13, 461-477 (1973).
- Webster, G. R., Thompson, R. H. Observations on the presence of lysolecithin in nervous tissues. Biochim Biophys Acta. 63, 38-45 (1962).
- Doetsch, F., Caille, I., Lim, D. A., García-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. Subventricular Zone Astrocytes Are Neural Stem Cells in the Adult mammalian Brain. Cell. 97, 1-20 (1999).
- Doetsch, F., Petreanu, L., Caille, I., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. EGF converts transit-amplifying neurogenic precursors in the adult brain into multipotent stem cells. Neuron. 36, 1021-1034 (2002).
- Baraban, S. C. Reduction of seizures by transplantation of cortical GABAergic interneuron precursors into Kv1.1 mutant mice. Proc Natl Acad Sci U S A. 106, 15472-15477 (2009).
- Richardson, R. M., Barbaro, N. M., Alvarez-Buylla, A., Baraban, S. C. Developing cell transplantation for temporal lobe epilepsy. Neurosurg Focus. 24, E17-E17 (2008).
- Alvarez-Dolado, M. Cortical inhibition modified by embryonic neural precursors grafted into the postnatal brain. J Neurosci. 26, 7380-7389 (2006).
