מיקוד של מבנים מוחיים עמוקים עם Microinjections עבור משלוח של תרופות, וקטורים ויראליים, או השתלת תאים
Summary
במאמר זה, אנו מציגים שיטה להפוך מחטים נימי זכוכית עם לומן 50 מיקרומטר. טכניקה זו מפחיתה באופן משמעותי את הנזק המוחי, ממזער דיפוזיה פסיבית של תרופות ומאפשרת מיקוד מדויק לתוך המוח מכרסמים.
Abstract
Microinjections parenchyma לתוך המוח הם הליכים חשובים כדי לספק תרופות, וקטורים ויראליים או השתלות תאים. הנגע במוח מחט הזרקת מייצרת במהלך מסלולו הוא החשש העיקרי במיוחד במוח העכבר לא רק המוח הוא קטן, אבל גם לפעמים זריקות מרובות נדרשים. אנחנו מראים כאן שיטה לייצר מחטים נימי זכוכית עם 50 מיקרומטר לומן אשר מפחית באופן משמעותי את הנזק המוחי ומאפשרת מיקוד מדויק לתוך המוח מכרסמים. שיטה זו מאפשרת משלוח של בנפחים קטנים (20-100 nl), מפחיתה את הסיכון לדימום, וממזער דיפוזיה פסיבית של תרופות לתוך parenchyma המוח. באמצעות גודל שונים של צינורות זכוכית נימי, או שינוי לומן מחט, מספר סוגים של חומרים ותאי ניתן להזריק. Microinjections עם צינור זכוכית נימי מייצגים שיפור משמעותי טכניקות ההזרקה והמוח עמוק מיקוד עם נזק סביבתי מינימלי מכרסמים קטנים.
Protocol
Discussion
שיטה הראו בסרטון הזה הוא מאוד שימושי כדי לספק את רוב סמים או וקטורים ויראליים למקומות מאוד מדויק לתוך המוח. חלק מן היתרונות העיקריים של השיטה הזו הן אמינות של נקודת המיקוד, את הדיוק של זריקות ואת גודל קטן של פגיעה מוחית ולנזק בדרכי 1, 2, 5, 6. לאחר הטכניקה היא סטנדרט?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
OG-P נתמך על ידי מענק של CONACyT (CB-2008-101476) ו FRABA (686/10). AQ-H נתמך על ידי המכון הלאומי לבריאות בארה"ב, הווארד יוז רפואי במכון, רוברט ווד ג'ונסון קרן וקרן תא גזע מרילנד.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Capillary glass tube | Wiretrol I | 5-000-1001 | ||
| Micropipette puller | Kopf | Model 730 | ||
| Microforge | World Precision Instruments | Model 48000 | ||
| Mineral oil | MSDS | M7700 | ||
| High-vacuum grease | Dow Corning | 05054-AB | ||
| Anesthesia: 2.5% Avertin | 2,2,2-tribromoethanol + tert-amyl alcohol, 1:1 w/v | |||
| Heater pad | Mastex | Model 900 | ||
| Stereotactic device | Kopf | Model Kopf-900 | ||
| Surgical scalpel blade # 15 | Medi-Cut | |||
| Micro driller | Ideal Micro Drill | 67-1000 | ||
| Fine forceps | Fine Scientific Tools | |||
| 1-μL Micropipette | Rainin | |||
| Parafilm M. | ||||
| Surgical microscope | Zeiss | Vasiorkop with Contraves system | ||
| Microinjector | Narishige | Model MO-10 |
References
- Menn, B. Origin of oligodendrocytes in the subventricular zone of the adult brain. J Neurosci. 26, 7907-7918 (2006).
- Gonzalez-Perez, O., Romero-Rodriguez, R., Soriano-Navarro, M., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. Epidermal Growth Factor Induces the Progeny of Subventricular Zone Type B Cells to Migrate and Differentiate into Oligodendrocytes. Stem Cells. 27, 2032-2043 (2009).
- Hall, S. M. Some aspects of remyelination after demyelination produced by the intraneural injection of lysophosphatidyl choline. J Cell Sci. 13, 461-477 (1973).
- Webster, G. R., Thompson, R. H. Observations on the presence of lysolecithin in nervous tissues. Biochim Biophys Acta. 63, 38-45 (1962).
- Doetsch, F., Caille, I., Lim, D. A., García-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. Subventricular Zone Astrocytes Are Neural Stem Cells in the Adult mammalian Brain. Cell. 97, 1-20 (1999).
- Doetsch, F., Petreanu, L., Caille, I., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. EGF converts transit-amplifying neurogenic precursors in the adult brain into multipotent stem cells. Neuron. 36, 1021-1034 (2002).
- Baraban, S. C. Reduction of seizures by transplantation of cortical GABAergic interneuron precursors into Kv1.1 mutant mice. Proc Natl Acad Sci U S A. 106, 15472-15477 (2009).
- Richardson, R. M., Barbaro, N. M., Alvarez-Buylla, A., Baraban, S. C. Developing cell transplantation for temporal lobe epilepsy. Neurosurg Focus. 24, E17-E17 (2008).
- Alvarez-Dolado, M. Cortical inhibition modified by embryonic neural precursors grafted into the postnatal brain. J Neurosci. 26, 7380-7389 (2006).
