عقب التعرض لمستضد ، مجموعات سكانية فرعية من الخلايا باء يمكنهم الخضوع لعملية إعادة التركيب المعروفة باسم الطبقة التبديل (CSR) لإنتاج الأجسام المضادة مع وظائف isotypes المستجيب متميزة. بروتوكول المبينة في هذا التقرير يشرح كيف يمكن أن يتسبب المسؤولية الاجتماعية للشركات وتحليلها<em> في المختبر</em> لأغراض الدراسة وظيفة الخلايا باء.
الحصانة الخلطية هي فرع من فروع الجهاز المناعي التي تحتفظ بها الخلايا البائية وتوسطت من خلال إفراز الأجسام المضادة. عند تنشيط خلايا B ، بموضع المناعي يخضع لسلسلة من التعديلات الوراثية لتغيير القدرة ملزمة وظيفة المستجيب يفرز الأجسام المضادة. ومن ابرز هذه العملية من خلال إعادة التركيب الجيني حدث المعروفة باسم التهجين تبديل فئة (CSR) التي يتم فيها استبدال الضد الغلوبولين المناعي isotype الافتراضي لأحد IgG و IgA ، أو إيج. كل isotype تمتلك وظائف متميزة المستجيب مما يجعل المسؤولية الاجتماعية للشركات حاسما في الحفاظ على الحصانة.
وتوسطت تنويع موضع المناعي من سيتيدين انزيم نازعة أمين التنشيط التي يسببها (AID). شريط فيديو التخطيطي اصفا هذه العملية بالتفصيل على شبكة الإنترنت (http://video.med.utoronto.ca/videoprojects/immunology/aam.html). عادة يتم دراسة النشاط المعونة ومسار المسؤولية الاجتماعية للشركات في تقييم وظيفة الخلايا باء والحصانة الخلطية في الفئران. بروتوكول المبينة في هذا التقرير وسيلة لعزل الخلايا B من الطحال الفئران والتحفيز لاحقة مع lipopolysaccharide البكتيرية (LPS) للحث على التحول إلى فئة IgG3 (على الضد isotypes الأخرى أنظر الجدول 1). بالإضافة إلى ذلك ، تم استخدام صبغة الفلورسنت تلوين الخلية Carboxyfluorescein succinimidyl استر (CFSE) لمراقبة تقسيم خلية من خلايا حفز ، وهي عملية حاسمة لisotype التبديل 1 و 2.
تنظيم المساعدات والآلية التي يحدث المسؤولية الاجتماعية للشركات لا تزال غير واضحة ، وبالتالي في فحوصات المختبر تبديل فئة توفر طريقة موثوق بها لاختبار هذه العمليات في نماذج الماوس المختلفة. كانت هذه المقايسات التي سبق استخدامها في سياق نقص الجينات باستخدام الفئران بالضربة القاضية 3. وعلاوة على ذلك ، يمكن التبديل في المختبر من خلايا B يسبقه تنبيغ الفيروسية لتعديل التعبير الجيني بواسطة الحمض النووي الريبي ضربة قاضية أو التحوير التعبير 4-6. أثرت البيانات من هذه الأنواع من التجارب فهمنا للنشاط AID ، القرار من ردود الفعل المسؤولية الاجتماعية للشركات ، والأجسام المضادة التي تتوسط فيها الحصانة في الماوس.
بروتوكول المبينة أعلاه يوفر الفحص القياسية لتحليل التعبير AID وظيفة خلال تبديل طبقة من الخلايا الأولية باء الفئران. هذا البروتوكول يستخدم LPS البكتيرية للحث على التحول من الغلوبولين المناعي لIgG3 ، على الرغم من أن تتمكن من إجراء تعديلات على وسائل الإعلام للحث على تحفيز ?…
The authors have nothing to disclose.
ونحن ممتنون إلى المختبر لإجراء مناقشات مفيدة مارتن. ويدعم هذا المنشور من خلال منحة من المعهد الكندي للبحوث الصحية (MOP – 89783). معتمد بواسطة كرسي أبحاث كندا جائزة الفئة الثانية.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Phosphate Buffered Saline | Gibco | 14190 | ||
EasySep Mouse B Cell Enrichment Kit | Stemcell Technologies | 19754 | ||
Polystyrene tubes | Becton Dickinson Falcon | 352058 | ||
Bovine Serum Albumin | Sigma Aldrich | A7030 | ||
CellTrace CFSE Cell Proliferation Kit | Invitrogen | C34554 | ||
Bovine Calf Serum | HyClone | SH30072.03 | ||
RPMI 1640 Culture Medium | Gibco | 11875 | ||
Lipopolysaccharides from Escherichia coli | Sigma Aldrich | L6529 | ||
β-mercaptoethanol | Gibco | 21985 | ||
Fetal Bovine Serum | HyClone | SH30396.03 | ||
Normal Mouse Serum | Jackson ImmunoResearch | 011-000 | ||
Purified Rat Anti-Mouse CD16/CD32 (Mouse BD Fc Block) | Becton Dickinson Pharmingen | 553141 | ||
Rat Anti-Mouse IgG3 | Becton Dickinson Pharmingen | 553401 |