在果蝇幼虫分部轴突在体内的突触小泡的可视化
Summary
这个协议，讨论了现场清扫<em>果蝇</em>幼虫为目的的绿色荧光标记的微管轨道上轴突囊泡的运动成像。
Abstract
阐明轴突运输的机制已证明是在决定如何在长途运输中的缺陷会影响不同的神经系统疾病非常重要。在这一重要过程中的缺陷，可以对神经元的运作和发展产生不利影响。我们已经制定了夹层的协议，旨在揭露<em>果蝇</em>幼虫节段性的神经实时查看轴突运输。从赫德和萨克斯顿（1996）用于幼虫节段性神经immunolocalizatin公布的，我们已经适应了这种实时成像的协议。仔细解剖和适当的缓冲液条件是最大化解剖幼虫的寿命的关键。做好时，幼虫解剖生理条件下强大的囊泡运输2-3小时。我们使用的UAS – GAL4方法<sup> 1</sup>表达绿色荧光蛋白标记在一个单一的轴突或幼虫节段性神经轴突，通过使用不同的神经元GAL4司机的应用程序或突触囊泡。其它荧光标记的标记，例如mitochrondria（MitoTracker）或溶酶体（LysoTracker），可也适用于前观看的幼虫。 GFP -囊泡运动和粒子的运动可以被看作同时使用单独的波长。
Protocol
Discussion
在在果蝇幼虫节段性神经突触囊泡运输体内成像研究轴突运输的机制是一个功能强大的工具。我们以前使用的协议，以评估表达扩大polyQ重复澄清，如何扩大重复影响囊泡运输的动态3幼虫神经内运输动态。使用此协议的囊泡的运动速度可确定转换的视频流，一个kymograph。使用遗传学，GFP囊泡运输可以在一个单一的轴突或几个轴突内的可视化，通过使用一个特定的GAL4驱…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
SG是从美国纽约州立大学布法罗分校和约翰R. Oishei基金会的资金支持。
MK是支持在UB由CURCA学生研究奖。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 1 Pair Micro Dissection Scissors | Fine Scientific | Spring scissors – 6mm blade. 0.125 mm tip diameter | ||
| 2 Pair Forceps | Fischer Scientific | Fisherbrand Dissecting Micro-Adson serrated tip forceps | ||
| Box of Dissection Pins | Fine Scientific | Minutien Pins 0.1mm diameter |
References
- Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118, 401-415 (1993).
- Hurd, D. D., Saxton, W. M. Kinesin mutations cause motor neuron disease phenotypes by disrupting fast axonal transport in Drosophila. Genetics. 144, 1075-1085 (1996).
- Gunawardena, S., Her, L. S., Brusch, R. G., Laymon, R. A., Niesman, I. R., Gordesky-Gold, B., Sintasath, L., Bonini, N. M., Goldstein, L. S. Disruption of axonal transport by loss of huntingtin or expression of pathogenic polyQ proteins in Drosophila. Neuron. 40, 25-40 (2003).
