Summary

실험 면역 Hypophysitis의 유도를위한 마우스 뇌하수체 Immunogen의 준비

Published: December 17, 2010
doi:

Summary

면역 hypophysitis는 마우스 뇌하수체의 단백질 추출물을 주사로 쥐 복제하​​실 수 있습니다.

Abstract

면역 hypophysitis가 발생하거나 autoimmunity 1과 함께 뇌하수체의 만성 염증이다. 그것은 전통적으로 희귀한 질병으로 간주 되었으나보고 최근 몇 년 동안 현저하게 증가하고 있습니다. Hypophysitis는 사실, 이러한 CTLA – 4 2, PD – 1 수용체와 같은 T lymphocytes에 표현 억제 수용체를 차단하는 항체로 치료 암 환자의 '부작용'로 쓰시하지 개발하고 있습니다. 면역 hypophysitis는 도움이되는 3 혼합 뇌하수체 단백질과 쥐를 주사하여 실험적으로 유도된 수 있습니다. 이 동영상이 문서에서 우리는 마우스 뇌하수체 분비 및 SJL 생쥐의 면역 hypophysitis를 유도에 적합한 형태로 그들을 준비하는에서 단백질을 추출하는 방법을 보여줍니다.

Protocol

실험 프로토콜 이 실험 프로토콜의 첫 번째 단계는 마우스 뇌하수체의 땀샘의 다수를 수집하는 것입니다. 두 번째 단계는 단백질 추출물을 준비하기 위해 분비를 균질하는 것입니다. 세 번째 단계는 기름 혼합 이러한 단백질을 유상으로 만들다하는 것입니다. 1 단계 : 마우스 뇌하수체 분비의 수집과 저장 마우스 뇌하수체는 시신경 ch…

Discussion

면역 hypophysitis와 함께 첫 번째 환자는 1962 4보고했다는 사실에도 불구하고, 병원성 뇌하수체 autoantigens 5를 식별하기 위해 남아있다. 동물 모델은 환자 치료에 번역 아르 생체의 발견을 은닉이 autoantigens을 파악하는 것은 매우 유용할 수 있습니다. 이 문서는 실험 동물에서 면역 hypophysitis를 유도에 적합 형태로 뇌하수체 단백질을 준비 간단한 절차를 시연했다.

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

이 작품은 PC에 NIH 부여 DK080351에 의해 지원되었다.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
15-ml Falcon tubes        
homogenization buffer        
phosphate buffered saline        
protease inhibitor cocktail        
Polytron homogenizer        
BCA assay   Pierce 23225  
Complete Freund’s Adjuvant (CFA)   Sigma F-5881  
Mycobacterium tuberculosis   Becton Dickinson 231141  
2.5 mL Hamilton gastight syringe        
22-gauge micro-emulsifying needle        

References

  1. Caturegli, P., Newschaffer, C., Olivi, A., Pomper, M. G., Burger, P. C., Rose, N. R. . Autoimmune Hypophysitis Endocr Rev. 26, 599-614 (2005).
  2. Blansfield, J. A., Beck, K. E., Tran, K., Yang, J. C., Hughes, M. S., Kammula, U. S., Royal, R. E., Topalian, S. L., Haworth, L. R., Levy, C., Rosenberg, S. A., Sherry, R. M. Cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen-4 blockage can induce autoimmune hypophysitis in patients with metastatic melanoma and renal cancer. J Immunother. 28, 593-598 (2005).
  3. Tzou, S. C., Lupi, I., Landek, M., Gutenberg, A., Tzou, Y. M., Kimura, H., Pinna, G., Rose, N. R., Caturegli, P. Autoimmune Hypophysitis of SJL mice: Clinical Insights from a New Animal Model. Endocrinology. 149, 3461-3469 (2008).
  4. Goudie, R. B., Pinkerton, P. H. Anterior hypophysitis and Hashimoto’s disease in a woman. J Pathol Bacteriol. 83, 584-585 (1962).
  5. Caturegli, P. Autoimmune hypophysitis: an underestimated disease in search of its autoantigen(s). J Clin Endocrinol Metab. 92, 2038-2040 (2007).
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Cite This Article
Tzou, S., Landek-Salgado, M. A., Kimura, H., Caturegli, P. Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis. J. Vis. Exp. (46), e2181, doi:10.3791/2181 (2010).

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