Assay Slice Organotypic עבור זמן לשגות הדמיה ברזולוציה גבוהה נדידת הנוירונים במוח אחרי לידה
Summary
פרוטוקול זה מתאר assay פרוסה organotypic אופטימיזציה עבור המוח לאחר הלידה ברזולוציה גבוהה זמן לשגות הדמיה של הגירה neuroblast בזרם נודדות מקורי.
Abstract
Neurogenesis במוח לאחר הלידה תלוי ותחזוקה של שלושה אירועים ביולוגיים: הפצת ובתאים, הגירה של neuroblasts, כמו גם ההבחנה והאינטגרציה של נוירונים חדשים לתוך מעגלים עצביים הקיימים. עבור neurogenesis הלידה של נורות חוש הריח, אירועים אלה הם נפרדים בתוך שלושה תחומים מובחנים מבחינה אנטומית: התפשטות מתרחשת בעיקר באזור subependymal (SEZ) של החדרים לרוחב, נודדות neuroblasts לעבור דרך הנחל נודדות מקורי (RMS), ו נוירונים חדשים להבדיל לשלב בתוך נורות חוש הריח (OB). שלושת התחומים לשמש פלטפורמות אידיאליות ללמוד את מנגנוני הסלולר, המולקולרית, ואת פיזיולוגיים המווסתים את כל האירועים ביולוגי מובהק. מאמר זה מתאר assay פרוסה organotypic אופטימיזציה עבור רקמת המוח לאחר הלידה, שבה התנאים תאיים מקרוב לחקות את הסביבה vivo להעברת neuroblasts. אנו מראים כי assay שלנו מספק לתנועה אחידה, אוריינטציה, ומהירה של neuroblasts בתוך RMS. Assay זה יהיה מתאים במיוחד ללימוד תקנה תא אוטונומית ובלתי אוטונומי של הגירה העצבית על ידי ניצול צולבות השתלת גישות מעכברים על רקע גנטי שונה.
Protocol
Discussion
נדידת נוירונים ב-RMS היא מרכיב חיוני של neurogenesis הלידה של נורות ההרחה 1. הגירה דרך RMS מתרחשת במטוס משיק אל פני השטח של המוח. Neuroblasts בעקיפין נודדות נבדלים רדיאלית נודדות תאים בהתבסס על המיקום של מקור אב שלהם, כמו גם גורלם השונה של מוצרים העצבית הסופי 1, 2, 3. אוכלוסי…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
אנו מודים דן McWhorter עבור המספרת על פרוטוקול בסרטון. עבודה זו נתמכת על ידי NIH גרנט 5R01NS062182, מענק הפדרציה האמריקאית לחקר הזדקנות, מוסדיים וקרנות הוענק HTG.
References
- Ghashghaei, H. T., Lai, C., Anton, E. S. Neuronal migration in the adult brain: are we there yet. Nat. Rev. Neurosci. 8, 141-151 (2007).
- Valiente, M., Marin, O. Neuronal migration mechanisms in development and disease. Curr. Opin. Neurobiol. 20, 68-78 (2010).
- Rakic, P. Evolution of the neocortex: a perspective from developmental biology. Nat. Rev. Neurosci. 10, 724-735 (2009).
- Jaglin, X. H., Chelly, J. Tubulin-related cortical dysgeneses: microtubule dysfunction underlying neuronal migration defects. Trends Genet. 25, 555-566 (2009).
- Carro, M. S. The transcriptional network for mesenchymal transformation of brain tumours. Nature. 463, 318-325 (2010).
- Wu, W. Directional guidance of neuronal migration in the olfactory system by the protein Slit. Nature. 400, 331-336 (1999).
- Hu, H., Tomasiewicz, H., Magnuson, T., Rutishauser, U., U, . The role of polysialic acid in migration of olfactory bulb interneuron precursors in the subventricular zone. Neuron. 16, 735-743 (1996).
- Shapiro, E. M., Gonzalez-Perez, O., Garcia-Verdugo, M. a. n. u. e. l., Alvarez-Buylla, J., &, A., Koretsky, A. P. Magnetic resonance imaging of the migration of neuronal precursors generated in the adult rodent brain. Neuroimage. , (2006).
- Vreys, R. MRI visualization of endogenous neural progenitor cell migration along the RMS in the adult mouse brain: validation of various MPIO labeling strategies. Neuroimage. 49, 2094-2103 (2010).
- Davenne, M., Custody, C., Charneau, P., Lledo, P. M. In vivo imaging of migrating neurons in the mammalian forebrain. Chem. Senses. 30, 115-116 (2005).
- Mirzadeh, Z., Doetsch, F., Sawamoto, K., Wichterle, H., Alvarez-Buylla, A. The subventricular zone en-face: wholemount staining and ependymal. J. Vis. Exp. , (2010).
- Shen, Q. Adult SVZ stem cells lie in a vascular niche: a quantitative analysis of niche cell-cell interactions. Cell Stem Cell. 3, 289-300 (2008).
- Tavazoie, M. A specialized vascular niche for adult neural stem cells. Cell Stem Cell. 3, 279-288 (2008).
- Mirzadeh, Z., Merkle, F. T., Soriano-Navarro, M., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. Neural Stem Cells Confer Unique Pinwheel Architecture to the Ventricular Surface in Neurogenic Regions of the Adult Brain. Cell Stem Cell. 3, 265-278 (2008).
- Polleux, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Ghosh, A. The slice overlay assay: a versatile tool to study the influence of extracellular signals on neuronal. Sci. STKE. , L9-L9 (2002).
- Murase, S. &. a. m. p. ;. a. m. p., Horwitz, A. F. Deleted in colorectal carcinoma and differentially expressed integrins mediate the directional migration of neural precursors in the rostral migratory stream. J. Neurosci. 22, 3568-3579 (2002).
- Suzuki, S. O. &. a. m. p. ;. a. m. p., Goldman, J. E. Multiple cell populations in the early postnatal subventricular zone take distinct migratory pathways: a dynamic study of glial and neuronal progenitor migration. J. Neurosci. 23, 4240-4250 (2003).
- Ghashghaei, H. T. The role of neuregulin-ErbB4 interactions on the proliferation and organization of cells in the subventricular zone. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 103, 1930-1935 (2006).
- Khodosevich, K., Seeburg, P. H., Monyer, H. Major signaling pathways in migrating neuroblasts. Front Mol. Neurosci. 2, 7-7 (2009).
- Jacquet, B. V. Analysis of neuronal proliferation, migration and differentiation in the postnatal brain using equine infectious anemia virus-based lentiviral vectors. Gene Ther. 16, 1021-1033 (2009).
