أسلوب الخميرة مستعمرة التضمين
Summary
وهناك طريقة لتضمين مستعمرات الخميرة السماح لsectioning المجهر الضوئي والإلكترون. هذا البروتوكول يسمح بتحديد توزيع الخلايا والخلايا sporulated الكاذبة داخل المستعمرات توفير أداة جديدة لفهم تنظيم أنواع الخلايا داخل المجتمع الفطرية.
Abstract
الزخرفة من أنواع مختلفة من الخلايا في الأجنة هي الآلية الرئيسية في عملية التنمية metazoan. مجتمعات الكائنات الدقيقة ، مثل المستعمرات والأغشية الحيوية أيضا عرض نماذج من أنواع الخلايا. على سبيل المثال ، في الخميرة س. البيرة ، لا الخلايا والخلايا sporulated الكاذبة موزعة بشكل متجانس في المستعمرات. لا تزال على أهمية وظيفية من الزخرفة والآليات الجزيئية التي تكمن وراء هذه الأنماط غير مفهومة.
أحد التحديات فيما يتعلق بالتحقيق في أنماط من أنواع الخلايا في مستعمرات الفطرية هو أنه على عكس الأنسجة metazoan ، ونسبيا في مستعمرات الخلايا ضعيفة المرفقة مع بعضها البعض. بصفة خاصة ، مستعمرات فطرية لا تحتوي على نفس المستوى واسعة من المصفوفة خارج الخلية الموجودة في معظم الأنسجة. نحن هنا التقرير على طريقة لدمج وsectioning مستعمرات الخميرة التي تكشف عن أنماط الداخلية من أنواع الخلايا في هذه المستعمرات. ويمكن استخدام هذه الطريقة لتحضير المقاطع سميكة (0.5 μ) مفيدة للفحص المجهري والمقاطع الخفيفة رقيقة (0،1 μ) مناسبة لانتقال المجهر الإلكتروني. ويمكن بسهولة زقاق الكاذبة خلايا يمكن تمييزها عن خلايا الخميرة بيضوي الشكل بواسطة المجهر الضوئي ، في حين أن بنية الداخلية لهذه الخلايا التي يمكن تصور EM.
يستند هذا الأسلوب على المستعمرات المحيطة بها مع آغار ، تسلل لهم Spurr المتوسطة ، ثم sectioning. المستعمرات التي يبلغ قطرها في حدود 1-2 مم هي مناسبة لهذا البروتوكول. بالإضافة إلى الرؤية والداخلية من المستعمرات ، وطريقة تسمح برؤية منطقة مستعمرة أن يغزو آغار الكامنة.
Protocol
Discussion
طريقة عرض يكشف عن الهياكل الداخلية للمستعمرات. لأن الطريقة فعالة في تحديد أنماط من أنواع الخلايا في مجموعة س. سلالات خميرة مع morphologies مستعمرة مختلفة ، وأيضا في الأنواع متناقض S. ذات الصلة 5 ، الأسلوب ومن المرجح أيضا أن تعمل على نطاق واسع من الفطريات والك?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وقد تم تمويل البحث من قبل المعاهد الوطنية للصحة 1R15GM094770.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Osmium tetroxide | Electron Microscopy Sciences | RT 19152 | ||
| Silicone embedding molds | Fisher Scientific | NC 9975029 | ||
| Cycloaliphatic epoxide resin | Electron Microscopy Sciences | RT 15004 | ERL 4221 | |
| Epoxy resin | Electron Microscopy Sciences | RT 13000 | DER 736 | |
| Nonenyl Succinic Anhydride | Electron Microscopy Sciences | RT 19050 | NSA | |
| 2-Dimethyl aminoethanol | Electron Microscopy Sciences | RT 13300 | DMAE | |
| Mounting media | KPL | 71-00-16 | ||
| Rotating wheel | Ted Pella | Pelco 1055 | ||
| Microtome | Leica | Ultracut S |
References
- Kimmel, A. R., Firtel, R. A. Breaking symmetries: regulation of Dictyostelium development through chemoattractant and morphogen signal-response. Curr Opin Genet Dev. 14, 540-540 (2004).
- Palkova, Z., Vachova, L. Life within a community: benefit to yeast long-term survival. FEMS Microbiol Rev. 30, 806-806 (2006).
- Shapiro, J., Vachova, L. The significances of bacterial colony patterns. Bioessays. 17, 597-597 (1995).
- Shapiro, J., Vachova, L. Thinking about bacterial populations as multicellular organisms. Annu Rev Microbiol. 52, 81-81 (1998).
- Engelberg, D. Multicellular stalk-like structures in Saccharomyces cerevisiae. J Bacteriol. 180, 3992-3992 (1998).
- Scherz, R., Shinder, V., Engelberg, D. Anatomical analysis of Saccharomyces cerevisiae stalk-like structures reveals spatial organization and cell specialization. J Bacteriol. 183, 5402-5402 (2001).
- Piccirillo, S. The Rim101p/PacC pathway and alkaline pH regulate pattern formation in yeast colonies. Genetics. 184, 707-707 (2010).
- Sniegowski, P. D., Dombrowski, P. G., Fingerman, E. Saccharomyces cerevisiae and Saccharomyces paradoxus coexist in a natural woodland site in North America and display different levels of reproductive isolation from European conspecifics. FEMS Yeast Res. 1, 299-299 (2002).
- Piccirillo, S., Honigberg, S. M. Sporulation patterning and invasive growth in wild and domesticated yeast colonies. Res Microbiol. 161, 390-390 (2002).
- Vachova, L. Architecture of developing multicellular yeast colony: spatio-temporal expression of Ato1p ammonium exporter. Environ Microbiol. , (2009).
