Işık ve elektron mikroskopi için kesit maya kolonileri izin gömmek için bir yöntem. Bu protokol, bir mantar toplum içinde hücre tiplerinin organizasyon anlayışına yönelik yeni bir araç sağlayan koloniler içinde sporulated hücreleri ve pseudohyphal hücrelerin dağılımı belirliyor.
Abstract
Embriyolar farklı hücre tipleri Desenlendirme metazoan gelişiminde kilit bir mekanizma. Koloniler ve biyofilm olarak mikroorganizmalar, topluluklar da hücre tiplerinin kalıplarını gösterilecek. Örneğin, maya S. cerevisiae, sporulated hücreleri ve pseudohyphal hücrelerin düzgün koloniler halinde dağıtılan değildir. Desenlendirme ve bu kalıplar altında yatan moleküler mekanizmaları fonksiyonel önemi halen yeterince anlaşılamamıştır.
Mantar kolonilerin hücre tiplerinin kalıplarını soruşturma açısından bir sorun metazoan doku aksine, koloniler halinde hücrelerin nispeten zayıf birbirine bağlı olduğunu. Özellikle, mantar kolonileri, en dokularda bulunan ekstrasellüler matriks aynı geniş düzeyde içermez. İşte bu kolonilerin hücre tiplerinin iç desenler ortaya koymaktadır maya kolonileri gömme ve kesit için bir yöntem rapor. Bu yöntem, ışık mikroskobu ve transmisyon elektron mikroskopi için uygun ince bölümler (0,1 μ) için yararlıdır (0,5 μ) kalınlığında kesitler hazırlamak için kullanılabilir. Aşçı ve pseudohyphal hücreleri kolayca bu hücrelerin iç yapısı EM tarafından görüntülenmiştir olabilir, ışık mikroskobu ile oval maya hücreleri ayırt edilebilir.
Yöntemi, agar kolonileri çevreleyen, onları Spurr orta infiltre ve sonra kesit dayanmaktadır. Çapı 1-2 mm aralığında bir Kolonileri, bu protokol için uygundur. Kolonilerin iç görüntülenmesine ek olarak, yöntem temel agar işgal koloni bölgesi görselleştirme sağlar.
Protocol
1. Colony İzolasyon ve Fiksasyon Belirtilen süre için agar 300 kolonileri (izole edilmiş bir koloni çapı 1-2 mm olmalıdır) inkübe edin. Koloni (yüz yukarı) ve dar bir spatula ile altta yatan orta çıkarın. % 2 agar birkaç damla koyun 42 ° C katılaşır önce 1 ml agar yüzünde Pipetman ucu ve hemen yer koloni kullanarak bir mikroskop lamı üzerine. 42 ° C kolonisi üzerinde% 2 agar birkaç damla koyun ve sağlamlaştırmak için izin. Bu protokolün k…
Discussion
Sunulan yöntem kolonilerin iç yapıları ortaya koymaktadır. S. bir dizi hücre tiplerinin kalıplarını belirleyen yöntem etkili olduğundan cerevisiae suşlarının farklı koloni morfolojileri ve aynı zamanda ilgili bir tür S. paradoksus 5, yöntem aynı zamanda geniş bir mantar ve diğer mikroorganizmalar üzerinde çalışmak için muhtemeldir .
Yöntemin başarısı için kritik bir adım koloninin dahil olmak üzere tüm koloni, protokol boyunca ag…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Araştırma NIH 1R15GM094770 tarafından finanse edildi.