Polar lipid özler bireysel glycerolipids Kompozisyon ve yağ asidi kompozisyonu basit ve sağlam bir lipid profil deneyde belirlenir. Bu amaçla, glycerolipids ince tabaka kromatografisi ile izole edilir ve onların açil grupları transmethylation tabi. Yağ açil methylesters gaz-sıvı kromatografisi ile sayısallaştırılmış.
Biyolojik membranlar ayrı hücreler çevreden. Fosfatidilkolin veya phosphatidylethanolamine, hücreleri ve çevreleri arasındaki kimyasal değişimi için hem sınırları ve arayüzleri olarak hareket form bilayeri membranlar gibi çok hücreli bitki ve hayvanlar, glycerolipids, tek bir hücre. Hayvanların aksine, bitki hücreleri fotosentez için özel bir organel kloroplast var. (MGDG) monogalactosyldiacylglycerol digalactosyldiacylglycerol (DGDG), sulfoquinovosyldiacylglycerol (SQDG) 4: kloroplastın karmaşık membran sistemi yani benzersiz glycerolipids, fosfor eksikliği glikolipitler içerir. Bu lipitlerin rolleri sadece yapısal dışındadır. Bu glikolipitler ve diğer glycerolipids fotosistem I ve II fotosentez 8,11 glycerolipids katılımı gösteren kristal yapıları bulundu. Fosfat açlık sırasında, DGDG fosfolipitler 9,12 kaybını telafi etmek extraplastidic membranlar aktarılır.
Bu lipitlerin biyosentezi ve fonksiyon bilgimizin Arabidopsis thaliana 14 ile biyokimyasal ve genetik çalışmalar bir arada elde edilmiştir. Bu çalışmalar sırasında, polar lipid analizi için basit bir prosedür lipid mutantlar tarama ve analiz için gerekli ve detaylı olarak özetlenen olacaktır. Bir yaprak lipid özü ilk ince tabaka kromatografisi (TLC) ile ayrılmış ve glycerolipids iyot buharı ile geri dönüşümlü lekeli. Bireysel lipidler TLC plağı koparılmış ve alev iyonizasyon algılama (FID GLC) (Şekil 1) ile birleştiğinde gaz-sıvı kromatografisi ile analiz edilir yağ açil methylesters (Fames) dönüştürülür. Bu yöntem, mutant tarama için güvenilir bir araç olduğu kanıtlanmıştır. Örneğin tgd1, 2,3,4 endoplazmik retikulum-plastid lipid kaçakçılığı mutantlar anormal bir galactoglycerolipid birikimine dayalı bulunmuştur: trigalactosyldiacylglycerol (TGDG) ve göreli 18:03 miktarda bir azalma (karbonlar: double bağ) 3,13,18,20 zarı lipidler yağ açil grupları. Bu yöntem ayrıca substrat 6 olarak lipidler kullanarak proteinlerin enzimatik faaliyetleri belirlemek için uygulanabilir.
TLC GLC ile birleştiğinde tesislerinde polar lipid kantitatif analiz için sağlam ve hızlı bir araç sağlar. Lipid bileşimi küçük değişiklikler tespit edilebilir, bu nedenle bu yöntem, polar lipid metabolik yollar 1,20 engelli mutantlar büyük ölçekli tarama için kullanılır olmuştur . Bu yöntem ayrıca, substrat olarak polar lipidler kullanan enzimler izleme faaliyetleri için yaygın olarak kullanılır . 2,6,7
Yaprakları yanı sıra, bu kök ve tohumları veya kloroplast ve mitokondri gibi hücre içi fraksiyonları gibi diğer bitki dokularının lipid kompozisyonu da aynı şekilde tespit edilebilir.
Burada kullanılan çözücü sistemi (aseton, toluen, su), bitkilerde glikolipitler ve fosfolipidlerin ayrılması için optimize edilmiştir. Ancak, tgd1, 2,3,4 mutantlar ve izole kloroplastların tetragalactosyldiacylglycerol PC ile çalışırken TGDG PE ile birlikte çalışır. Bu durumda, kloroform, metanol, asetik asit ve su (85: 20: 10: 4, v / v / v / v) ile çözücü sistem 13 kullanılır . Bazen iki farklı çözücü sistemlerini kullanarak iki boyutlu TLC, daha fazla ayrı glikolipitler ve fosfolipitler 19 yapılır . Buna ek olarak, bitki dokularında doğrudan TLC 5 başlangıç ayrımı olmadan toplam yağ asidi profili belirlemek için GLC takip FAME reaksiyon tabi olabilir. Gösterdi TLC GLC sisteminin yanı sıra, lipid profili kullanılan başka bir yöntem, doğrudan elektrosprey iyonizasyon tandem kütle spektrometresi 17 dayanmaktadır . Bu yöntemde ilk kromatografik ayırma özü lipitlerin atlanır. Ancak, bu yöntem, laboratuvar veya mutant taraması için rutin analizler için daha az kullanışlı hale getirir pahalı ekipman ve deneyimli personel gerektirir.
The authors have nothing to disclose.
Bu çalışma, ABD Ulusal Bilim Vakfı Christoph Benning bir hibe ile desteklenmektedir.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
α-naphthol | Sigma-Aldrich | N1000 | ||
Methanolic HCL 3N | Sigma-Aldrich | 33050-U | Dilute to 1N by methanol | |
Si250-PA TLC plates | J.T.Baker | 7003-04 | With pre-absorbent | |
TLC chamber | Sigma-Aldrich | Z266000 | ||
Screw cap tubes | VWR | 53283-800 | ||
Scew caps | Sun Sri | 13-425 | ||
PTFE disk | Sun Sri | 200 608 | ||
GLC system | Hewlett Packard | HP6890 | ||
DB-23 column | J&W Scientific | 122-2332 | ||
GLC vials | Sun Sri | 500 132 | ||
Caps of GLC vials | Sun Sri | 201 828 | ||
Chemstation software | Agilent | G2070AA |