Как ниши и стволовые клетки образуются во время развития является важным вопросом практические последствия. В<em> Drosophila</em> Яичников, зародышевой линии стволовых клеток и их соматического ниши форме в течение личиночного развития. Это видео демонстрирует, как до расчленения, пятна и смонтировать женщин гонады с конца третьего возраста (LL3)<em> Drosophila</em> Личинок.
Многие органы зависят от стволовых клеток для их развития в период эмбриогенеза и для технического обслуживания или ремонта в течение взрослой жизни. Понимание того, как стволовые клетки образуются, и как они взаимодействуют с окружающей их средой Поэтому крайне важно для понимания развития, гомеостаза и болезни. Яичник плодовой мушки дрозофилы служил влиятельной моделью для взаимодействия зародышевой линии стволовых клеток (GSCs) с их соматических клетках поддержки (ниши) 1, 2. Известно расположение нишу и GSCs, в сочетании со способностью к генетически манипулировать ими, позволило исследователям выяснить различных взаимодействий между стволовыми клетками и их ниши 3-12.
Несмотря на огромное количество информации о механизмах управления GSC обслуживания и дифференциацию, относительно мало известно о том, как GSCs и их соматической форме ниши в процессе разработки. Около 18 соматических ниши, которых клеточные компоненты включают нити терминала и крышка клетки (рис. 1), форму в течение третьего личиночного возраста 13-17. GSCs происходят из первичных половых клеток (PGCs). PGCs размножаться на ранних личиночных стадиях, но после образования нишу подгруппе PGCs становится GSCs 7, 16, 18, 19. Вместе нишу соматических клеток и GSCs сделать функциональный блок, который производит яйца в течение всей жизни организма.
Многие вопросы, касающиеся образования GSC единицы остаются без ответа. Такие процессы, как координация между клеток-предшественников для ниш и прекурсоров стволовых клеток, или поколение асимметрии в PGCs, поскольку они становятся GSCs, наилучшим образом может быть изучен в личинку. Тем не менее, методические исследования личиночного развития яичников физически сложно. Во-первых, личиночной яичников малы. Даже в конце личиночной стадии они только 100 мкм в диаметре. Кроме того, яичники являются прозрачными и встроены в белый жир тела. Здесь мы опишем шаг за шагом протокол для выделения яичниками с конца третьего возраста (LL3) Drosophila личинки, после окрашивания с флуоресцентными антителами. Мы предлагаем некоторые технические решения проблем, таких как размещение яичников, окрашивания и стирки тканей, которые не тонут, и убедившись, что антитела проникают в ткани. Этот протокол может быть применен к ранее личиночной стадии и личиночной яички, а также.
Это видео демонстрирует изоляции и окраске протокол конце третьего возраста яичники личиночной. Для выполнения этого протокола в плановом порядке и надежно, следует обратить внимание на следующие моменты:
The authors have nothing to disclose.
И. М. поддерживается Мари Кюри реинтеграции гранта. Эта работа была поддержана Израиль науке нет фонда Грант. 1146/08, по Хелен и Мартина Киммел Институт Исследования стволовых клеток в Институт Вейцмана и Лир благотворительный фонд.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
NaCl | J.T.Baker | |||
Kcl | Merck | |||
CaCl2 | Sigma-Aldrich | |||
MgCl2 | Merck | |||
Sucrose | J.T.Baker | |||
Hepes | Sigma-Aldrich | |||
PBS | Sigma-Aldrich | |||
Triton X-100 | Sigma-Aldrich | |||
Albumin Bovine Fraction V | MP Biomedicals | 160069 | ||
Dumont biology tweezers 5 dumstar polished | FST Fine Science Tools | 11295-10 | ||
Nickel plated pin holder | FST Fine Science Tools | 26018-17 | ||
s.s minutien pins 0.1mm diam, 10mm long | FST Fine Science Tools | 26002-10 | ||
9 well plates 85X100 mm, 22mm o.d.x7mm deep | CORNING | 7220-85 | ||
Stereo Microscope MZ 16.5 with a standard transmitted light base TL ST | Leica | |||
6 well plates | Costar | 3516 | ||
Slides | Menzel Glaser GmbH | 798 | ||
Cover slips | Corning | 2940-223 | ||
Mounting media | Vectashield | H-1200 | ||
Cell strainer | Falcon | FAL352350 | ||
1B1 antibody | Developmental Studies Hybridoma Bank | |||
Anti-Traffic Jam | Laboratory of Dr. Dorothea Godt | |||
Anti-Vasa | Laboratory of Dr. Ruth Lehmann | |||
Anti β-Galactosidase | Cappel | |||
Secondary Antibodies | Jackson ImmunoResearch |