해부 그리고 스테 이닝 Drosophila 애벌레 난소
Summary
틈새와 줄기 세포를 개발하는 동안 양식 얼마나 실용적인 의미가있는 중요한 질문이다. 에<em> Drosophila</em> 난소 배아 라인 줄기 세포 및 체세포의 틈새는 애벌레 개발하는 동안 형식입니다. 이 동영상은 늦은 세번째 instar (LL3)에서 여성 생식선을, 해부하다 얼룩 및 마운트하는 방법을 보여줍니다<em> Drosophila</em> 애벌레.
Abstract
많은 기관 embryogenesis 동안에 성인 생활 동안 유지 보수 또는 수리를 위해 자신의 개발을위한 줄기 세포에 따라 달라집니다. 그들이 환경과 상호 작용하는 방법에 줄기 세포 형태, 방법을 이해하는 것은 개발, 항상성 및 질병을 이해 그러므로 매우 중요합니다. 과일 파리 Drosophila melanogaster의 난소는 체세포 지원 전지 (틈새) 1, 2와 세균 라인 줄기 세포 (GSCs)의 상호 작용에 대한 영향력 모델로 재직하고 있습니다. 유전자를 조작하는 능력을 결합 틈새와 GSCs의 알려진 위치, 줄기 세포와 그 틈새 3-12 사이의 상호 작용의 다양한 명료하게하다하는 연구자를 허용하고 있습니다.
GSC 유지 및 분화를 조절하는 메커니즘에 대한 정보의 풍부한에도 불구하고, 상대적으로 조금은 GSCs 및 체세포의 틈새 시장 개발 중에 양식 방법에 대한 알려져있다. 그의 세포 컴포넌트 단자 필라멘트와 캡 세포 (그림 1), 세 번째 애벌레 instar 13-17 동안 양식을 포함 약 18 체세포의 틈새. GSCs는 원시 배아 세포 (PGCs)에서 발생한. PGCs 일찍 애벌레 단계에서 세포 분열 따위에 의해 번식하지만 틈새의 형성 다음 PGCs의 하급 집단은 GSCs 7, 16, 18, 19이됩니다. 함께, 체세포의 틈새 세포와 GSCs은 유기체의 일생 동안 계란을 생산하는 기능 단위를합니다.
GSC 단위의 형성에 관한 많은 질문도 답이 남아 있습니다. 이러한 전구체 틈새와 줄기 세포 엽 성의 전구 물질에 대한 세포, 또는 그들이 GSCs가로의가 PGCs 내에서 비대칭 세대 간의 조정하는 프로세스는 최고의 유충에서 공부하실 수 있습니다. 그러나 애벌레 난소 개발 방식 연구 물리적으로 도전합니다. 첫째, 애벌레 난소 작은 수 있습니다. 비록 늦은 애벌레 단계에서 그들은 전반에만 100μm 수 있습니다. 또한, 난소 투명하고 하얀 지방이 신체에 박혀있다. 여기 형광 항체와 얼룩 다음 늦은 세번째 instar (LL3) Drosophila의 유충에서 난소를 분리를위한 단계별 절차를 설명합니다. 우리는, 난소의 위치를 침몰하지 티슈 얼룩 및 세척하고, 항체가 조직에 침투되었는지 확인하는 등의 문제 몇 가지 기술적인 솔루션을 제공합니다. 이 프로토콜은 이전의 애벌레 단계와뿐만 아니라 애벌레 testes에 적용할 수 있습니다.
Protocol
Discussion
이 비디오는 후반 세번째 instar 애벌레의 난소의 격리 및 얼룩 프로토콜을 보여줍니다. 일상적으로 안정이 프로토콜을 수행하려면, 관심은 다음 사항에 지불되어야합니다
- 동기화 및 잘 발달 애벌레의 경우, 이상의 크롤 링은 피해야합니다.
- 작은 반투명 난소의 손실을 피하기 위해 지방 몸이 그대로 해부하다에 있는지 확인하십시오. 이것은 (두 번째 혹은 세 instar의 시작) 이하 난?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
IM은 마리 퀴리 다시 통합 교부금에 의해 지원됩니다. 이 작품은 이스라엘 과학 기금 부여 번호에 의해 지원되었다. 1146년부터 1108년까지, 헬렌과 줄기 세포 과학의 웨이즈만 연구소에서 연구 및 레어 자선 재단 마틴 킴멀 연구소.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| NaCl | J.T.Baker | |||
| Kcl | Merck | |||
| CaCl2 | Sigma-Aldrich | |||
| MgCl2 | Merck | |||
| Sucrose | J.T.Baker | |||
| Hepes | Sigma-Aldrich | |||
| PBS | Sigma-Aldrich | |||
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | |||
| Albumin Bovine Fraction V | MP Biomedicals | 160069 | ||
| Dumont biology tweezers 5 dumstar polished | FST Fine Science Tools | 11295-10 | ||
| Nickel plated pin holder | FST Fine Science Tools | 26018-17 | ||
| s.s minutien pins 0.1mm diam, 10mm long | FST Fine Science Tools | 26002-10 | ||
| 9 well plates 85X100 mm, 22mm o.d.x7mm deep | CORNING | 7220-85 | ||
| Stereo Microscope MZ 16.5 with a standard transmitted light base TL ST | Leica | |||
| 6 well plates | Costar | 3516 | ||
| Slides | Menzel Glaser GmbH | 798 | ||
| Cover slips | Corning | 2940-223 | ||
| Mounting media | Vectashield | H-1200 | ||
| Cell strainer | Falcon | FAL352350 | ||
| 1B1 antibody | Developmental Studies Hybridoma Bank | |||
| Anti-Traffic Jam | Laboratory of Dr. Dorothea Godt | |||
| Anti-Vasa | Laboratory of Dr. Ruth Lehmann | |||
| Anti β-Galactosidase | Cappel | |||
| Secondary Antibodies | Jackson ImmunoResearch |
References
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