تشريح وتلون ذبابة الفاكهة اليرقات المبايض
Summary
كيف محاريب والخلايا الجذعية خلال نموذج التنمية هو السؤال المهم مع الآثار العملية. في<em> ذبابة الفاكهة</em> المبيض ، والخلايا الجذعية الجرثومية الخط والشكل الجسدي مطلبهم خلال نمو اليرقات. هذا الفيديو يوضح كيفية تشريح ، وصمة عار وجبل المناسل الإناث من طور مرحلي third المتأخرة (LL3)<em> ذبابة الفاكهة</em> اليرقات.
Abstract
العديد من الأجهزة تعتمد على الخلايا الجذعية من أجل تنميتها وخلال مرحلة التطور الجنيني للصيانة أو ترميم خلال فترة البلوغ. فهم كيفية تشكل الخلايا الجذعية ، وكيفية تفاعلها مع بيئتها ، من الأهمية بمكان لفهم التنمية ، التوازن والمرض. وقد عمل المبيض من melanogaster ذبابة الفاكهة ذبابة الفاكهة نموذجا للتفاعل مؤثر من الخلايا الجذعية الجرثومية خط (GSCs) مع دعم خلاياهم الجسدية (المتخصصة) 1 ، 2. وقد أتاح الموقع معروف من مكانة وGSCs ، ويقترن بالقدرة على معالجة وراثيا لهم والباحثين لتوضيح مجموعة متنوعة من التفاعلات بين الخلايا الجذعية ومطلبهم 12/03.
على الرغم من ثروة من المعلومات حول آليات مراقبة وصيانة GSC التمايز ، لا يعرف إلا القليل نسبيا حول كيفية GSCs مطلبهم والجسدية خلال نموذج التنمية. حوالي 18 محاريب الجسدية ، والتي تشمل المكونات الخلوية وخلايا شعيرات محطة كاب (الشكل 1) ، وشكل خلال طور مرحلي اليرقات third 13-17. GSCs تنشأ من خلايا جرثومية بدائية (PGCs). PGCs تتكاثر في مراحل اليرقات في وقت مبكر ، ولكن في أعقاب تشكيل مجموعة فرعية متخصصة ليصبح PGCs GSCs 7 ، 16 ، 18 ، 19. معا ، فإن الخلايا الجسدية وGSCs المتخصصة في جعل وحدة وظيفية التي تنتج البيض طوال فترة حياة الكائن الحي.
أسئلة كثيرة فيما يتعلق بتشكيل وحدة GSC تبقى دون جواب. وأفضل مثل عمليات التنسيق بين الخلايا السليفة للمحاريب والسلائف الخلايا الجذعية ، أو جيل من التباين داخل PGCs عندما تصبح GSCs ، يمكن دراستها في اليرقة. ومع ذلك ، دراسة منهجية للتنمية المبيض اليرقات يمثل تحديا جسديا. الأولى ، هي المبايض اليرقات الصغيرة. حتى في مراحل اليرقات أواخر هم فقط عبر 100μm. بالإضافة إلى ذلك ، المبيضين وشفافة هي جزء لا يتجزأ من الدهون في الجسم الأبيض. نحن هنا وصف بروتوكول خطوة بخطوة لعزل المبيضين من أواخر يرقات ذبابة الفاكهة طور مرحلي third (LL3) ، تليها تلطيخ مع الأضداد الفلورسنت. نحن نقدم بعض الحلول التقنية لمشاكل مثل تحديد المبيضين ، وتلطيخ وغسل الأنسجة التي لا تغرق ، والتأكد من أن الأجسام المضادة تخترق الأنسجة. ويمكن تطبيق هذا البروتوكول على مراحل في وقت سابق من اليرقات والخصيتين اليرقات كذلك.
Protocol
Discussion
هذا الفيديو يوضح عزلة والبروتوكول في الدقائق الاخيرة من تلطيخ المبيضين اليرقات طور مرحلي. لتنفيذ هذا البروتوكول بشكل روتيني وموثوق بها ، ينبغي إيلاء الانتباه إلى النقاط التالية :
- ليرقات متزامنة ومتطورا بشكل جيد ، ي?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
ويدعم الدردشة عن طريق منح ماري كوري إعادة الاندماج. وأيد هذا العمل من جانب إسرائيل لا علم منحة الصندوق. 1146-1108 ، من قبل هيلين ومارتن كيميل معهد أبحاث الخلايا الجذعية في معهد وايزمان للعلوم ، ومؤسسة Leir الخيرية.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| NaCl | J.T.Baker | |||
| Kcl | Merck | |||
| CaCl2 | Sigma-Aldrich | |||
| MgCl2 | Merck | |||
| Sucrose | J.T.Baker | |||
| Hepes | Sigma-Aldrich | |||
| PBS | Sigma-Aldrich | |||
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | |||
| Albumin Bovine Fraction V | MP Biomedicals | 160069 | ||
| Dumont biology tweezers 5 dumstar polished | FST Fine Science Tools | 11295-10 | ||
| Nickel plated pin holder | FST Fine Science Tools | 26018-17 | ||
| s.s minutien pins 0.1mm diam, 10mm long | FST Fine Science Tools | 26002-10 | ||
| 9 well plates 85X100 mm, 22mm o.d.x7mm deep | CORNING | 7220-85 | ||
| Stereo Microscope MZ 16.5 with a standard transmitted light base TL ST | Leica | |||
| 6 well plates | Costar | 3516 | ||
| Slides | Menzel Glaser GmbH | 798 | ||
| Cover slips | Corning | 2940-223 | ||
| Mounting media | Vectashield | H-1200 | ||
| Cell strainer | Falcon | FAL352350 | ||
| 1B1 antibody | Developmental Studies Hybridoma Bank | |||
| Anti-Traffic Jam | Laboratory of Dr. Dorothea Godt | |||
| Anti-Vasa | Laboratory of Dr. Ruth Lehmann | |||
| Anti β-Galactosidase | Cappel | |||
| Secondary Antibodies | Jackson ImmunoResearch |
References
- Fuller, M. T., Spradling, A. C. Male and female Drosophila germline stem cells: two versions of immortality. Science. 316, 402-404 (2007).
- Li, L., Xie, T. Stem cell niche: structure and function. Annual review of cell and developmental biology. 21, 605-631 (2005).
- Chen, D., McKearin, D. Gene circuitry controlling a stem cell niche. Curr Biol. 15, 179-184 (2005).
- Kai, T., Spradling, A. An empty Drosophila stem cell niche reactivates the proliferation of ectopic cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100, 4633-4638 (2003).
- Kai, T., Spradling, A. Differentiating germ cells can revert into functional stem cells in Drosophila melanogaster ovaries. Nature. 428, 564-569 (2004).
- Lopez-Onieva, L., Fernandez-Minan, A., Gonzalez-Reyes, A. Jak/Stat signalling in niche support cells regulates dpp transcription to control germline stem cell maintenance in the Drosophila ovary. Development. 135, 533-540 (2008).
- Song, X., Zhu, C. H., Doan, C., Xie, T. Germline stem cells anchored by adherens junctions in the Drosophila ovary niches. Science. 296, 1855-1857 (2002).
- Tazuke, S. I. A germline-specific gap junction protein required for survival of differentiating early germ cells. Development. 129, 2529-2539 (2002).
- Xie, T., Spradling, A. C. decapentaplegic is essential for the maintenance and division of germline stem cells in the Drosophila ovary. Cell. 94, 251-260 (1998).
- Xie, T., Spradling, A. C. A niche maintaining germ line stem cells in the Drosophila ovary. Science. , 290-328 (2000).
- Guo, Z., Wang, Z. The glypican Dally is required in the niche for the maintenance of germline stem cells and short-range BMP signaling in the Drosophila ovary. Development. 136, 3627-3635 (2009).
- Wang, X., Harris, R. E., Bayston, L. J., Ashe, H. L. Type IV collagens regulate BMP signalling in Drosophila. Nature. 455, 72-77 (2008).
- Godt, D., Laski, F. A. Mechanisms of cell rearrangement and cell recruitment in Drosophila ovary morphogenesis and the requirement of bric a brac. Development. 121, 173-187 (1995).
- Sahut-Barnola, I., Godt, D., Laski, F. A., Couderc, J. L. Drosophila ovary morphogenesis: analysis of terminal filament formation and identification of a gene required for this process. Developmental biology. 170, 127-135 (1995).
- Song, X., Call, G. B., Kirilly, D., Xie, T. Notch signaling controls germline stem cell niche formation in the Drosophila ovary. 134, 1071-1080 (2007).
- Zhu, C. H., Xie, T. Clonal expansion of ovarian germline stem cells during niche formation in Drosophila. Development. 130, 2579-2588 (2003).
- Ward, E. J. Stem cells signal to the niche through the Notch pathway in the Drosophila ovary. Curr Biol. 16, 2352-2358 (2006).
- Gilboa, L., Lehmann, R. Repression of primordial germ cell differentiation parallels germ line stem cell maintenance. Curr Biol. 14, 981-986 (2004).
- Gilboa, L., Lehmann, R. Soma-germline interactions coordinate homeostasis and growth in the Drosophila gonad. Nature. 443, 97-100 (2006).
