엔지니어링된 심장 조직 이식 다음과 같은 면역 반응의 평가 (EHT)에 대한 Bioluminescence 이미징

Summary

이 비디오의 사용을 보여줍니다<em> 생체내에</em쥐에서 엔지니어링된 심장 조직 이식 (EHT) 이후 면역 반응을 연구하기> bioluminescence 이미징.

Abstract

심장 조직 공학의 다양한 기법을 기본 또는 bioartificial 중 발판 재료, 같은 섬유소 또는 콜라겐 등 hydrogels에 심장 myocytes의 함정 수사와 myocyte monolayers ¹ 스택을 사용하여 비계 전략을 포함하여 지난 수십 년간 추진하고 있습니다. 이러한 개념은 손상된 심장 기능 (예 : 심근 경색 후)의 복원 또는 실험 모델 (예 : 예측 독성학 및 약물 검사 또는 질병 모델링)로 목표로하고 있습니다. 설계 심장 조직 (EHT)의 주입 후 세포 생존의 정확한 모니터링 이제 bioluminescence 이미징 (BLI) 기법 ² – 생체내에서 사용 가능한되었다. 여기 반딧불 루시페라제 (; ³ 로사 / 루시페라제 – 루 TG)의 유비 쿼터스 표현과 유전자 변형 쥐 긴장에서 섬유소 기반 EHT의 생성에 대해 설명합니다. 주입은 주입 EHT 다음받는 유기체의 면역 반응을 평가하기 다른 쥐 종자의 큰 omentum으로 수행됩니다. BLI와 효소 링크된 단백질 스팟 기법 (ELISPOT) 면역 반응의 평가 BLI의 가용성을 확인에 의해 생성된 결과의 비교.

Protocol

1. EHT 생성 및 문화 약관 섬유소 기반 EHT의 제조는 다른 네 설명된대로 수행되었다. 간단히, 주입 목적으로 섬유소 기반 EHT를 생성하는, 마스터 믹스는 신생아 로사 / 루시페라제 – 루 형질 전환 쥐의 마음 소 피브리노겐 및 Matrigel에서 분리된 세포를 포함하는 준비되었다. 아가로 오스 캐스팅 금형은 6 잘 문화 요리에 위치 테플론 스페이서를 사용하여 준비되었습니다. ?…

Discussion

심장 수리를 위해 EHT 기술의 임상 구현하기 전에, 이러한 이식 후 세포와 매트릭스 구성 요소 또는 이식 생존 모두 immunogenicity 같은 근본적인 질문은 실험 모델로 평가해야합니다. 인 – 생체내 bioluminescence 이미징은 이식 후 모니터링 세포 생존에 유용한 새로운 기술을 나타냅니다 . 우리는 성공적으로 들어있는 섬유소 기반 EHT를 생성 긍정 루시페라제 (루크 +) 설립 프로토콜 ⁴ 적응?…

Materials

• LEW-Tg(Gt(ROSA)26Sor-luc)11Jmsk rats (NBPR rat number 0299, http://www.anim.med.kyoto-u.ac.jp/NBR/)
• Bovine fibrinogen (stock solution: 200 mg/ml plus aprotinin 5 μg/ml fibrinogen in NaCl 0.9%, Sigma F4753)
• Matrigel (BD Bioscience 356235)
• DMEM (Biochrome F0415)
• Horse serum (Gibco 26050)
• Penicillin/streptomycin (Gibco 15140)
• Insulin (Sigma-Aldrich I9278)
• Aprotinin (Sigma Aldrich A1153)
• d-Luciferin (Biosynth L-8220)
• Enzyme-linked immunosorbent spot (ELISpot) assay plates (Hassa Laborbedarf, S2EM004M99)