展示新型引力光谱仪的使用拉伸和测量纤维蛋白
Summary
这是一步一步引导显示的目的，操作，和代表从小说的引力谱仪结果。
Abstract
大分子结构的研究已成为澄清的分子机制和功能的关键。有能力的测试力量的依赖在蛋白质的结构特点的几个有限的，但重要的bioinstruments。规模一直是限制参数准确，研究人员可以窥视奈米世界的分子，如核酸，酶，和电机蛋白质，执行维持生命的工作。原子力显微镜（AFM）以及纤维蛋白的天然结构调整，以确定用电子显微镜看齐的距离分辨率。然而，在AFM力研究，是典型的力量远远比单个分子可能会遇到1，2。光陷阱（OT）的确定被困珠之间的相对距离都非常好，他们可以传授非常小的力量3。然而，他们不屈服正在研究分子的精确的绝对长度。分子模拟提供支持的信息，这样的实验，但在有限的能力来处理同样大的分子大小，长的时间框架，并说服一些研究人员在没有其他辅助证据2，4的情况下。
引力谱仪（队）的能力提供了一个独特的组合，填补了一个调查阿森纳一个关键的利基。该仪器能产生力量通常用98％或更好的精度从femtonewton范围nanonewton范围。目前距离测量，是能够解决绝对分子长度下降到5纳米，和相对珠对类似的光学陷阱与精密分离距离的。此外，政府飞行服务队可以确定伸展或开卷的力量接近平衡是，或提供了一个分级的力量，对任何测量的结构性变化并列。它甚至有可能，以确定有多少个氨基酸残基参与开卷事件在生理负荷力2。在那里有广泛的力量，必须先于任何检测的校准方法不同，政府飞行服务队的要求没有这样的力量校准5。通过其他方法的补充优势，政府飞行服务队会的桥梁，在了解至关重要的蛋白质等大分子的纳米力学的差距。
Protocol
Discussion
当转换到数字阈值的代表性的电影，它是为阈值的图像，以保持在每帧视频同一地区的关键。 ，因为在珠对珠彼此独立的，任何在阈值方面的漂移，也可能导致珠的重心之间的相对距离的漂移和引进重大错误。控制阈值面积减少的5倍，从26纳米的距离测量误差为5 nm。同样至关重要的是获得一个准确的测量半径为珠的珠子之间的比例，最终产生距离和力值的计算是非常重要的。
<p class="jove_conten…Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
基于这种材料是由国家科学基金会的支持下批准号0842736的工作。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 3-Aminopropyltriethoxysilane | Poly Sciences | 919-30-2 | ||
| Acetone | Fisher Scientific | A18P-4 | ||
| Pyridine | Sigma Aldrich | 110-86-1 | ||
| Glutaraldehyde | Fisher Scientific | G7776 | ||
| Glycine | Research Organics | BP381-1 | ||
| Tris | Sigma | 9682T | ||
| Sodium azide | Amresco | 71289 | ||
| BSA | Sigma Aldrich | AMR-0332-100G | ||
| NaCl | Sigma | S7653 | ||
| EDTA | MSI | E9884 | ||
| Nitrocellulose | Sigma | 60443 | ||
| N-N Dimethyl Formamide | Extracted from Large New | D4254 | ||
| Rabbit skeletal myosin II | Zealand White Rabbits (7-8) | NA | ||
| MF30 antibody (9-10) | Developmental Studies | MF30 | ||
| MF20 antibody (6) | Hybridoma Bank | MF20 | ||
| Lab microscope | Boreal | WW57905M00 | ||
| Equatorial mount | Celestron | CG-5 | ||
| Digital video cam | Sony | XCDV60 | ||
| Caliper release | Cabelas | IA-415482 | ||
| Compression spring | Jones Spring Co. | 723 | ||
| Extension spring | Jones Spring Co. | 770 | ||
| ImageJ | NIH | NA | ||
| Fire-i drivers & application | Unibrain | 3.80 | ||
| Excel | Microsoft | NA |
References
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