का पता लगाने के लिए प्रतिदीप्त इम्यूनो - रसायन विज्ञान के प्रयोग Edwardsiella ictaluri ( मैं punctatus) नमूने
Summary
यहाँ हम एक की लेबलिंग की अनुमति प्रक्रिया का वर्णन<em> Edwardsiella ictaluri बगल में</em> चैनल कैटफ़िश से histological वर्गों में<em> Ictalurus punctatus</em> एक माध्यमिक के रूप में एक प्राथमिक, और फ्लोरोसेंट FitC लेबल एंटीबॉडी के रूप में मोनोक्लोनल एंटीबॉडी के साथ अप्रत्यक्ष immunohistochemistry Ed9 का उपयोग कर. यह फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी का उपयोग जीवाणु का पता लगाने के लिए अनुमति दी.
Abstract
जबकि Edwardsiella ictaluri चैनल कैटफ़िश Ictalurus punctatus के एक प्रमुख रोगज़नक़ है और 1,2 पहले लगभग तीन दशकों की खोज की गई है, अब तक, इन लेखकों के ज्ञान के सर्वोत्तम करने के लिए कोई विधि में सीटू दृश्य के लिए अनुमति देने के लिए विकसित किया गया है histological वर्गों में बैक्टीरिया.
जबकि जीवाणु स्थानीयकरण पिछले प्लेट मायने रखता 3, radiometric लेबल 4, या bioluminescent बैक्टीरिया 5 का उपयोग अध्ययन में vivo में निर्धारित किया गया है, इन अध्ययनों की सबसे केवल सकल अंग स्तर पर प्रदर्शन किया गया एक अपवाद के साथ 6, . इस सीमा को विशेष चिंता का विषय है क्योंकि ई. ictaluri एक जटिल संक्रमण 1,7 चक्र है, और यह डाह कारकों 8,9 के एक किस्म है. ई. के जटिल बातचीत अपने मेजबान के साथ ictaluri साल्मोनेला typhi 10 है, जो उसी वर्गीकरण परिवार में कई मायनों में समान है .
यहाँ हम एक अप्रत्यक्ष इम्युनो – histochemistry मोनोक्लोनल Ed9 Ainsworth एट अल द्वारा वर्णित एंटीबॉडी का उपयोग 11. उपयोग जीवाणुओं का पता लगाने के लिए अनुमति देता है तकनीक का वर्णन.
संक्षेप में, एक अवरुद्ध सीरम आयल एम्बेडेड histological वर्गों के लिए लागू किया जाता है गैर – विशिष्ट नीलामी को रोकने के है. ई.: तो फिर, अनुभागों प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ incubated हैं ictaluri विशिष्ट मोनोक्लोनल एंटीबॉडी Ed9. अतिरिक्त एंटीबॉडी दूर rinsed और FitC लेबल माध्यमिक एंटीबॉडी जोड़ रहे हैं. Rinsing के बाद, एक फ्लोरोसेंट विशिष्ट बढ़ते मध्यम वर्गों के साथ बढ़ रहे हैं.
यह ई. का पता लगाने के लिए अनुमति दी चैनल कैटफ़िश के ऊतकों के histological वर्गों में स्वस्थानी में ictaluri.
Protocol
Discussion
इस प्रोटोकॉल विवरण कैटफ़िश histological वर्गों में रोगज़नक़ Edwardsiella ictaluri सीटू दृश्य के लिए एक तकनीक है. हमारे ज्ञान का सबसे अच्छा करने के लिए, यह पहली ऐसी प्रोटोकॉल में वर्णित है.
सबसे महत्वपूर्ण ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
लेखकों के लिए उनकी सहायता के विकास और immunohistochemistry प्रदर्शन के लिए मिशेल banes के तकनीकी सहायता के रूप में अच्छी तरह के रूप में डॉ. पेट्री Hanson, डा. ईल और तीमुथियुस ब्राउन पहचान करना चाहते हैं. इस परियोजना के USDA क्रिस परियोजना # MISV – 0801310 और मिसिसिपी पशु चिकित्सा स्टेट यूनिवर्सिटी कॉलेज द्वारा वित्त पोषित किया गया था.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
|---|---|---|
| Brain Infusion broth | Becton Dickinson | 237200 |
| MS222 | Argent Labs | |
| Whole mouse Serum | Cappel | 55989 |
| Goat anti-mouse FitC | Southern Biotech | 1010-04 |
| Permafluor | Lab Vision | Ta-030-FM |
| Potassium chloride (KCl) | Sigma | P-4504 |
| Triton-X | Sigma-Aldrich | X100-6X500ML |
| Bovine Serum Albumin | Sigma | 85040C |
| Potassium phosphate (KH2PO4) | Sigma | P-5379 |
| Sodium Bicarbonate (NaHCO3) | Sigma | S-5761 |
| Sodium chloride (NaCal) | Sigma | S-9625 |
| Sodium phosphate dibasic(Na2HPO4) | Sigma | S-9390 |
References
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