의 검출을위한 형광 단백질 화학의 이용 Edwardsiella ictaluri 채널 메기에 ( I. punctatus) 샘플
Summary
여기의 레이블을 허용하는 절차를 설명<em현장에서> Edwardsiella ictaluri</em> 채널 메기에서 histological 섹션<em> Ictalurus punctatus</em> 보조로 기본 및 형광 FitC 표시 항체 단클론 항체와 같은 간접 immunohistochemistry Ed9를 사용합니다. 이것은 형광 현미경을 사용하여 세균의 검출 허용.
Abstract
Edwardsiella ictaluri 채널 메기 Ictalurus punctatus의 주요 병원체이며 1,2 전 약 30 년간을 발견하고있는 동안, 지금까지,이 작가 '지식의 최고에, 어떤 방법의 현장 시각화에 수 있도록 개발되지 않았습니다 histological 섹션에 박테리아.
세균성 지방화는 플레이트 카운트 3, radiometric 표시된 4, 또는 발광 생물 세균 5를 사용하고 이전의 연구에서 생체내 결정하고있는 동안, 이러한 연구의 대부분은 한 가지 예외를 제외하고 6, 총 장기 수준에서 수행되었습니다. 이 제한은 특히 우려 때문에 E. ictaluri는 복잡한 감염 사이클 1,7을 가지고 있으며, 그것은 독성 요인 8,9 다양한 있습니다. E.의 복잡한 상호 작용 그 호스트 ictaluri 같은 taxonomic 가족에 살모넬라 균 10, 많은 측면에서 비슷합니다.
여기 에인 즈 워스 외 의해 설명되어있는 단클론 항체를 사용하여 Ed9 간접 단백질 histochemistry. 11을 사용하여 박테리아의 탐지를 위해 허용하는 방법을 설명합니다.
간단히 차단 혈청가 아닌 특정 기다리는을 방지하기 위해 파라핀 임베디드 histological 섹션에 적용됩니다. E. 그런 다음 섹션은 기본 항체와 incubated 아르 ictaluri 특정 단클론 항체 Ed9. 초과 항체가 떨어져 씻어서되고 FitC 라벨 이차 항체가 추가됩니다. rinsing 후, 섹션은 형광등 특정 설치 매체로 탑재하고 있습니다.
이것은 E.의 검색 허용 채널 메기 조직의 histological 섹션에 현장에 ictaluri.
Protocol
Discussion
이 프로토콜 세부 histological 섹션에서 메기 병원체 Edwardsiella ictaluri의 현장 시각화에 대한 기술. 우리의 지식의 최고하려면,이 설명 첫 번째와 같은 프로토콜입니다.
가장 중요한 단계는, 우리의 경험, 잘못된 긍정을 초래할 수로 불충 분한 세척으로 현재 프로토콜의 단계 4.4에서 설명하는 항체의 rinsing입니다.
이 기법의 결과를 해석과 함께 가장 ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
저자는 그들의 지원은 개발과 immunohistochemistry를 수행하는 기술 미쉘 베인스의 지원뿐만 아니라 박사 페트리 – 핸슨 박사와 티모시 브라운 에얼스를 인식하고 싶습니다. 이 프로젝트는 USDA 크리스 프로젝트 # MISV – 0801310로 및 동물용 의약품의 미시시피 주립 대학에 의해 투자되었다.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
|---|---|---|
| Brain Infusion broth | Becton Dickinson | 237200 |
| MS222 | Argent Labs | |
| Whole mouse Serum | Cappel | 55989 |
| Goat anti-mouse FitC | Southern Biotech | 1010-04 |
| Permafluor | Lab Vision | Ta-030-FM |
| Potassium chloride (KCl) | Sigma | P-4504 |
| Triton-X | Sigma-Aldrich | X100-6X500ML |
| Bovine Serum Albumin | Sigma | 85040C |
| Potassium phosphate (KH2PO4) | Sigma | P-5379 |
| Sodium Bicarbonate (NaHCO3) | Sigma | S-5761 |
| Sodium chloride (NaCal) | Sigma | S-9625 |
| Sodium phosphate dibasic(Na2HPO4) | Sigma | S-9390 |
References
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