偏光易位荧光蛋白爪蟾外胚层响应Wnt信号
Summary
非洲爪蟾胚胎外胚层已经成为一个有吸引力的模型研究细胞极性。描述一个试验，荧光蛋白的亚细胞分布在外胚层细胞进行评估。该协议将有助于地址问题涉及到空间的信号控制。
Abstract
细胞极性是一个动态调节胚胎发育过程中1，2两个内在因素和外在因素的真核细胞的根本属性。在本规例所涉及的信号转导通路之一是Wnt信号通路，这是胚胎发育过程中使用了许多人类疾病的3，4，5倍和关键。此通路的多个分子组成的协调调节信号在空间受限的方式，但基本的机制尚不完全清楚 。爪蟾胚胎上皮细胞是一个很好的系统研究各种信号蛋白的亚细胞定位。荧光融合蛋白是由RNA显微注射爪蟾胚胎中表达，外胚层外植体准备和蛋白定位是由epifluorescence评估。在本实验的协议，我们将描述如何Diversin，胞浆蛋白已在信令和细胞极性的决心6，7牵连的亚细胞定位爪外胚层细胞中的可视化研究 Wnt信号转导8。一个Wnt配体或Frizzled信号受体的共同表达改变Diversin分布与红色荧光蛋白，RFP的融合，和新兵到细胞膜的极化时尚8， 9。这种体外的协议应该是一个有益的补充，在体外培养的哺乳动物细胞，在空间控制信令不同于完整的组织，更是难以分析研究。
Protocol
Discussion
我们已经使用了上述协议，来表征的亚细胞定位Diversin。在动物极植，Diversin RFP的检测细胞核，并与G -微管蛋白，在冰冻切片（图1），一个中心体标记共同定位。一旦确定的一种蛋白质的亚细胞定位，删除构造可以生成，以确定哪些蛋白质域是必要的和足够的亚细胞定位。使用这种方法，已经Diversin中心体本地化域映射到中间的蛋白质的羧基端的域，都含有卷曲螺旋图案 8 。
<p class="jov…Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
索科尔实验室的研究是由卫生部全国Institues赞助。
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