Test in vitro de l'adhésion bactérienne sur des mammifères cellules épithéliales
Summary
Ce protocole est un test simple adhésion bactérienne consistant à compter le nombre de colonies bactériennes formant des unités qui sont collées sur des cellules cultivées. Le test est robuste, indépendante de l'adhésine étudié, et de nombreuses variations sont utilisés dans la plupart des laboratoires travaillant sur la pathogenèse bactérienne.
Abstract
Pour provoquer des infections, les bactéries colonisent doit leur hôte. Les bactéries pathogènes d'exprimer différentes molécules ou de structures capables de favoriser l'attachement aux cellules hôtes 1. Ces adhésines s'appuyer sur les interactions avec les récepteurs de l'hôte à la surface cellulaire ou des protéines solubles agissant comme un pont entre les bactéries et l'hôte. L'adhésion est une première étape essentielle avant l'invasion et / ou la sécrétion de toxines, il est donc un événement clé pour être étudiés dans la pathogénie bactérienne. Par ailleurs, les bactéries induisent souvent respectées délicieusement affiné les réponses cellulaires, les études qui ont donné naissance au domaine de la 2 'microbiologie cellulaire. Dosages robuste pour l'adhérence des bactéries sur les cellules hôtes et leur invasion par conséquent jouer un rôle clé dans la pathogenèse bactérienne et les études ont longtemps été utilisés dans de nombreux laboratoires pionniers 3,4. Ces tests sont maintenant pratiquée par la plupart des laboratoires travaillant sur la pathogenèse bactérienne.
Ici, nous décrivons un test standard de l'adhésion illustrant la contribution d'une adhésine spécifique. Nous utilisons la souche d'Escherichia coli 2787 5, une souche pathogène humaine exprimant la Autotransporter impliquées dans l'adhérence diffuse (ACRA) Adhesin. Comme contrôle, on utilise une souche mutante dépourvue du gène aida, 2787Δ aida (F. Berthiaume et M. Mourez, non publié), et une souche de laboratoire commercial de E. coli, C600 (New England Biolabs). Les bactéries sont de gauche à adhérer aux cellules de l'couramment utilisés HEp-2 lignées cellulaires épithéliales humaines. Ce test a été moins largement décrite avant 6.
Protocol
Discussion
Ce protocole décrit un dosage standard de l'adhérence des bactéries qui peuvent être modifiés pour étudier l'invasion (par exemple en utilisant la gentamicine protection de test 3). Le comptage des unités formant colonie permet la quantification, par comparaison avec les approches s'appuyant sur des techniques de visualisation standard sous un microscope, comme la coloration de Giemsa. Ce dernier ne donne qu'une vue qualitative de l'adhérence, mais est souvent un complément utile …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Le travail dans les laboratoires des auteurs est soutenu par des subventions de recherches en sciences naturelles et en génie du Canada, les Instituts de recherche en santé du Canada d', et le Programme des chaires de recherche du Canada. JL est soutenu par une bourse de la Groupe d'Etude des Protéines Membranaires (GEPROM) grâce au financement du Fonds de Recherche en santé du Québec.
Materials
| Reagent | Company | Catalogue number |
|---|---|---|
| High glucose DMEM | GIBCO-Invitrogen | 12430-054 |
| DDPBS | GIBCO-Invitrogen | 14190-144 |
| Bovine Growth Serum | Hyclone | SH3054 |
| Penicillin/Streptomycin | GIBCO-Invitrogen | 15140-148 |
| 24 well plates | Corning | 3337 |
| Triton X-100 | Fisher Scientific | BP151-100 |
References
- Kline, K. A. Bacterial adhesins in host-microbe interactions. Cell Host Microbe. 5, 580-580 (2009).
- Cossart, P., Boquet, P., Normark, S., Rappuoli, R. Cellular microbiology emerging. Science. 271, 315-315 (1996).
- Elsinghorst, E. A. Measurement of invasion by gentamicin resistance. Methods Enzymol. 236, 405-405 (1994).
- Pizarro-Cerda, J., Lecuit, M., Cossart, P., Sansonetti, P., Zychlinsky, A. . Molecular Cellular Microbiology. , 161-161 (2002).
- Srivastava, A., Isberg, R. R., Sansonetti, P., Zychlinsky, A. . Molecular Cellular Microbiology. , 179-179 (2002).
- Benz, I., Schmidt, M. A. Cloning and expression of an adhesin (AIDA-I) involved in diffuse adherence of enteropathogenic Escherichia coli. Infect Immun. 57, 1506-1506 (1989).
- Charbonneau, M. E., Berthiaume, F., Mourez, M. Proteolytic processing is not essential for multiple functions of the Escherichia coli autotransporter adhesin involved in diffuse adherence (AIDA-I). J Bacteriol. 188, 8504-8504 (2006).
- Jacques, M., Paradis, S. E. Adhesin-receptor interactions in Pasteurellaceae. FEMS Microbiol Rev. 22, 45-45 (1998).
- Auger, E. Host-pathogen interactions of Actinobacillus pleuropneumoniae with porcine lung and tracheal epithelial cells. Infect Immun. 77, 1426-1426 (2009).
- Jacques, M. Role of lipo-oligosaccharides and lipopolysaccharides in bacterial adherence. Trends Microbiol. 4, 408-408 (1996).
- Nataro, J. P., Kaper, J. B. Diarrheagenic Escherichia coli. Clin Microbiol Rev. 11, 142-142 (1998).
- Jallat, C., Darfeuille-Michaud, A., Rich, C., Joly, B. Survey of clinical isolates of diarrhoeogenic Escherichia coli: diffusely adhering E. coli strains with multiple adhesive factors. Res Microbiol. 145, 621-621 (1994).
