포유류의 상피 세포에 박테리아의 접착 시험 관내 분석
Summary
이 프로토콜은 교양 세포에 준수 아르 단위를 형성하는 박테리아 식민지의 숫자를 계산에 구성된 간단한 세균 유착 분석이다. 분석은 강력한이며, adhesin 독립 공부하고, 다수의 유사 콘텐츠는 세균 pathogenesis 작업을 대부분의 실험실에 사용됩니다.
Abstract
감염을 원인 박테리아들은 숙주를 식민지해야합니다. 세균성 병원균은 세포 하나를 호스트하기 위해 첨부 파일을 홍보할 수 다양한 분자 또는 구조를 표현한다. 이러한 adhesins는 숙주 세포 표면 수용체 또는 박테리아와 호스트 사이의 다리 역할을 수용성 단백질과 상호 작용에 의존하고 있습니다. 접착력 전에 침략 및 / 또는 독소의 분비에 중요한 첫 번째 단계이며, 따라서 그것은 세균 pathogenesis에서 공부하는 주요 행사입니다. 또한, 준수 박테리아는 종종 정교하게 미세 조정 세포 반응, '세포 미생물학'2의 분야에 출산을 가지고있는 연구를 유도. 세균성 호스트 세포의 접착과 침략에 대한 강력한 assays 따라서 세균 pathogenesis 연구의 핵심 역할을하고 오랫동안 많은 선구자 실험실 3,4에서 사용되었습니다. 이러한 assays 이제 세균 pathogenesis 작업 대부분의 실험실에서 연습하고 있습니다.
여기, 우리는 특정 adhesin의 기여를 설명하는 표준 준수 분석을 설명합니다. 우리는 대장균 스트레인 2787 5, 확산 준수 (아이다)에 관련된 autotransporter Adhesin을 표현하는 인간 병원성 변형을 사용합니다. 컨트롤로서, 우리는 아이다 유전자, 2787Δ 아이다 (F. 버타이오메와 M. Mourez, 발표되지 않은), 그리고 E. 상업 실험실 부담을 부족한 돌연변이 변형을 사용하여 대장균, C600 (뉴 잉글랜드 Biolabs). 박테리아는 일반적으로 사용되는 C 형 간염 – 2 인간 상피 세포주에서 세포을 준수하기 위해 남아 있습니다. 이 분석은 덜 광범위 6 이전에 설명되었습니다.
Protocol
Discussion
이 프로토콜은 (gentamicin 보호 분석 3을 사용 예) 침략을 공부하기 위해 수정할 수있는 표준 준수 세균 분석을 설명합니다. 콜로니 형성 단위의 계산은 Giemsa의 얼룩 같은 현미경 표준 시각화 기법에 의존 접근과 비교하여, 부량 수 있습니다. 후자는 접착력의 질적 전망을 제공하지만 접착력의 다양한 패턴을 차별하고 mechanistical 통찰력에게 9 줄 수 있기 때문에 종종 유용하게 보완합…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
저자의 연구실에서 작업은 자연 과학 및 캐나다의 공학 연구 협의회, 건강 연구의 캐나다 연구소, 그리고 캐나다 연구 의자 프로그램에서 교부금에 의해 지원됩니다. JL은 퐁 드 물리 엉 쌍떼 두 퀘벡에서 지원금을 통한 Groupe D' 에투드 데스 Protéines Membranaires (GEPROM)에서 화목에 의해 지원됩니다.
Materials
| Reagent | Company | Catalogue number |
|---|---|---|
| High glucose DMEM | GIBCO-Invitrogen | 12430-054 |
| DDPBS | GIBCO-Invitrogen | 14190-144 |
| Bovine Growth Serum | Hyclone | SH3054 |
| Penicillin/Streptomycin | GIBCO-Invitrogen | 15140-148 |
| 24 well plates | Corning | 3337 |
| Triton X-100 | Fisher Scientific | BP151-100 |
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