تشريح القلب في اليرقات ، اسماك الزرد الأحداث والكبار ، دانيو rerio</em
Summary
ووصف واضح وطريقة موحدة للتشريح والعزلة من القلب الزرد في مراحل تنموية متعددة. وتناقش أيضا الشرح وتقدير التقنيات.
Abstract
الزرد أصبحت كائن نموذج مفيد وعملي لدراسة القلب الجنينية للتنمية (انظر استعراض الاخيرة 1-6) ، ومع ذلك ، عمل فحص ما بعد الجنينية من خلال التنمية الكبار القلب كان محدودا 70-10. دراسة مورفولوجية المتغيرة للقلب النضج والشيخوخة هي مقيدة بسبب عدم وجود التقنيات المتاحة لتنظيم وعزل قلوب الأحداث والبالغين. من أجل تحليل التنمية على مدى عمر قلب السمكة ، ونحن تشريح قلوب الزرد في مراحل عديدة ومنها صورة لمزيد من التحليل 11. يمكن للميزات المورفولوجية للقلب بسهولة يمكن قياسها كميا ، ويمكن قلوب الفردية لمزيد من التحليل من قبل مجموعة من الأساليب القياسية. الزرد تنمو بنسب متفاوتة والنضج يرتبط على نحو أفضل مع حجم الأسماك من العمر ، وهكذا ، بعد التثبيت ، والأسماك ، وصورة قياس طول نحن كمقياس لنضوج الأسماك. هذا البروتوكول يفسر اثنين ، حجم تقنيات متميزة تعتمد على تشريح الزرد ، بدءا من طول اليرقات معيار 3.5mm (SL) مع قلوب طول البطين 100μm (VL) ، بين الكبار ، مع SL من 30mm و1MM VL أو أكبر. اليرقات السمكية وتعليم الكبار وهيئة مميزة جدا والتشكل الجهاز. اليرقات ليست فقط أصغر بكثير ، لديهم أقل الصباغ وكل جهاز هو بصريا من الصعب جدا التعرف عليها. لهذا السبب ، فإننا نستخدم تقنيات تشريح متميزة.
كنا قبل التشريح ، تثبيت إجراءات ، كما اكتشفنا أن تشريح قلوب مباشرة بعد euthanization لها التشكل أكثر تنوعا ، مع بالون فضفاض للغاية ومثل الأذينين مقارنة مع قلوب إزالة التثبيت التالية. ثابت السمك قبل التشريح والاحتفاظ بها في التشكل فيفو وموقف الغرفة (لا تظهر البيانات). بالإضافة إلى ذلك ، لأغراض العرض التوضيحي ، ونحن نستفيد من القلب (عضلة القلب) محددة GFP تيراغرام المعدلة وراثيا (myl7 : GFP) twu34 (12) ، والذي يسمح لنا تصور قلب كامل ومفيد بشكل خاص في المراحل المبكرة في التنمية عندما القلب التشكل هو أقل وضوحا من الأنسجة المحيطة بها. تشريح القلب يجعل إجراء مزيد من التحليل للخلية وعلم الأحياء الجزيئية الكامنة وراء تطور ونضوج القلب باستخدام التهجين في الموقع ، المناعية ، واستخراج الحمض النووي الريبي أو الأساليب التحليلية الأخرى أسهل في مرحلة ما بعد الزرد الجنينية. وسوف يوفر هذا البروتوكول تقنية قيمة لدراسة التنمية نضوج القلب والشيخوخة.
Protocol
Discussion
هذه الأساليب لتشريح القلب الزرد في مرحلة ما بعد جنينية الأسماك يسمح لإزالة كاملة من القلب التالفة. في حين أن هذا الأسلوب واضح ومباشر ، ويقدم أدلة لخفض الخارجية التي من شأنها منع إتلاف القلب ومطرد من ناحية لا بد لصغار السمك.
والخطو…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
بفضل Birne ماري Tsiola Areti ، ويبدو أن أوريبي استيفيز Jaymie Arelys. وأيد هذا العمل في جزء من جامعة مدينة نيويورك ومؤسسة البحوث وهوارد هيوز الطبي الصيفي المنح لطلاب المعهد برنامج المرحلة الجامعية (المهماز) والمعهد الوطني للصحة RO3 41702-00-01. وأيد أيضا البحوث في كلية كوينز ، وأجريت بعض التجارب على معدات من مرفق الأساسية للتصوير ، البيولوجيا الخلوية والجزيئية في كلية كوينز.
Materials
| Material | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| Paraformaldehyde | EMD | PX0055 | .04g/mL in PBS |
| Forceps #55 | FST | 11295-51 | |
| Micro-scissors | FST | 15005-08 | |
| Pin holder | FST | 26016-12 | |
| Micro-needles | FST | 10130-10 | |
| Nutrient Agar | BBL | 11472 | 23g/L in distilled H2O |
| Petri dishes | BD Falcon | 351029 | |
| PCR 8-tube strips | USA Scientific | 1402-2500 | |
| Digital Caliper | Fisher Scientific | 14-648-17 |
References
- Ahmad, N., Long, S., Rebagliati, M. A southpaw joins the roster: the role of the zebrafish nodal-related gene southpaw in cardiac LR asymmetry. Trends Cardiovasc Med. 14, 43-49 (2004).
- Armstrong, E. J., Bischoff, J. Heart valve development: endothelial cell signaling and differentiation. Circ Res. 95, 459-470 (2004).
- Bakkers, J., Verhoeven, M. C., Abdelilah-Seyfried, S. Shaping the zebrafish heart: from left-right axis specification to epithelial tissue morphogenesis. Dev Biol. 330, 213-220 (2009).
- Glickman, N. S., Yelon, D. Cardiac development in zebrafish: coordination of form and function. Semin Cell Dev Biol. 13, 507-513 (2002).
- Heicklen-Klein, A., McReynolds, L. J., Evans, T. Using the zebrafish model to study GATA transcription factors. Semin Cell Dev Biol. 16, 95-106 (2005).
- Schoenebeck, J. J., Yelon, D. Illuminating cardiac development: Advances in imaging add new dimensions to the utility of zebrafish genetics. Semin Cell Dev Biol. 18, 27-35 (2007).
- Beis, D. Genetic and cellular analyses of zebrafish atrioventricular cushion and valve development. Development. 132, 4193-4204 (2005).
- Lepilina, A. A dynamic epicardial injury response supports progenitor cell activity during zebrafish heart regeneration. Cell. 127, 607-619 (2006).
- Wills, A. A., Holdway, J. E., Major, R. J., Poss, K. D. Regulated addition of new myocardial and epicardial cells fosters homeostatic cardiac growth and maintenance in adult zebrafish. Development. 135, 183-192 (2008).
- Parichy, D. M., Elizondo, M. R., Mills, M. G., Gordon, T. N., Engeszer, R. E. Normal table of postembryonic zebrafish development: staging by externally visible anatomy of the living fish. Dev Dyn. 238, 2975-3015 (2009).
- Huang, C. J., Tu, C. T., Hsiao, C. D., Hsieh, F. J., Tsai, H. J. Germ-line transmission of a myocardium-specific GFP transgene reveals critical regulatory elements in the cardiac myosin light chain 2 promoter of zebrafish. Dev Dyn. 228, 30-40 (2003).
- Westerfield, M. The Zebrafish Book, A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). , (1995).
