Sélective transduction virale des adultes-né pour les neurones olfactifs chronique In vivo Stimulation optogénétique
Summary
Neurones adultes-né du bulbe olfactif peut être contrôlé à l'aide optogenetically Channelrhodopsin2 exprimant l'injection lentiviral dans le flux migratoire et rostrale photostimulation chronique avec une miniature implanté à LED.
Abstract
Interneurones locaux sont continuellement régénéré dans le bulbe olfactif des rongeurs adultes 1-3. Dans ce processus, appelé neurogenèse adulte, les cellules souches neurales dans les murs du ventricule latéral donner lieu à des neuroblastes qui migrent pour plusieurs millimètres le long du ruisseau rostrale migrateurs (RMS) à atteindre et à intégrer dans le bulbe olfactif. Pour étudier les différentes étapes et l'impact de l'intégration des neurones adultes nés dans les circuits préexistants olfactif, il est nécessaire de manière sélective l'étiquette et de manipuler l'activité de cette population spécifique de neurones. Le développement récent des technologies de l'optogénétique offre la possibilité d'utiliser la lumière pour activer précisément cette cohorte spécifique de neurones sans affecter les neurones entourant 4,5. Ici, nous présentons une série de procédures visant à exprimer de manière virale Channelrhodopsin2 (CHR2)-YFP dans une cohorte temporellement limitée des neuroblastes dans le RMS avant qu'ils atteignent le bulbe olfactif et devenir adulte-né neurons. De plus, nous montrons comment l'implant et calibrer une miniature à LED pour les maladies chroniques dans la stimulation in vivo de neurones exprimant CHR2-.
Protocol
Discussion
Des outils optogénétique ont récemment augmenté notre contrôle sur sélective populations neuronales, y compris les adultes neurones né dans le système olfactif. Nous décrivons ici comment effectuer une injection stéréotaxique d'un vecteur lentiviral exprimant CHR2-YFP dans une population spécifique de neurones adultes-né. En surveillant la période post-injection, nous sommes capables d'analyser et de manipuler l'activité d'une cohorte d'adultes-né des neurones avec un âge relatif hom…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par la compagnie d'assurance vie "Novalis Taitbout-", l'Ecole des Neurosciences de Paris (ENP), l'Agence Nationale de la Recherche "ANR-09-NEUR-004" dans le cadre de «ERA-NET NEURON» de programme FP7 de la Commission européenne, «Fondation pour la Recherche Médicale", la Fondation Letten et de la Fondation Pasteur.
Materials
| Material | Company | Catalogue No. |
| Ketamine | Merial | Imalgène 1000 |
| Xylazine | Bayer Health Care | Rompum 0.2% |
| Pipette Puller | Sutter | P-97 |
| Glass Capillaries (3.5″) | Drummond Scientific | 3-000-203-G/X |
| Nanoject II Microinjector | Drummond Scientific | 3-000-204 |
| High speed surgical drill | Fine Science Tools | 18000-17 |
| Micro Drill Steel Burrs 0.7mm tip diameter | Fine Science Tools | 19008-07 |
| LED CMS blue 4.6 W | OSRAM | LBW5SN |
| Female electrical connector (2.54 mm) | Fischer Elektronik | BL5.36Z |
| Current controller for LED (max: 1A) | A1W Electronik | HKO-KL50-1000 |
| Pulse generator | AMPI | Master-8 |
| Optical power meter | Thor Labs | PM100 |
| Cyanoacrylate adhesive | Loctite | 454 |
| Polycarboxylate cement (first layer cement) | Septodont | Selfast (#0068Q) |
| Methacrylate cement (second layer cement) | GC InternationalCorp. | Unifast Trad – Liquid (#339292) Unifast Trad – Powder (#339114) |
| Carprofen | Pfizer | Rimadyl |
References
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