慢性のためのアダルト生まれの嗅覚ニューロンの選択的なウイルス形質導入 in vivoで Optogenetic刺激
Summary
嗅球のアダルト生まれのニューロンはoptogenetically Channelrhodopsin2発現吻側渡り鳥ストリームとLEDが注入されたミニチュアと慢性的な光刺激にレンチウイルス注入を使用して制御することができます。
Abstract
地元の介在は、連続して1月3日成人げっ歯類の嗅球に再生成されます。このプロセスでは、側脳室の壁の神経幹細胞は、嗅球に到達して組み込むことが吻側渡り鳥ストリーム（RMS）に沿って数ミリ程度のために移行する神経芽細胞を生じさせる、成体のニューロン新生と呼ばれる。異なる手順と嗅覚回路を既存のに成人生まれのニューロンの統合の影響を調べるために、それはニューロンのこの特定の集団の活性を選択的にラベルを付けたり、操作する必要があります。 optogenetic技術の最近の開発は、正確に4,5周囲のニューロンに影響を与えずに、ニューロンのこの特定のコホートをアクティブにするには、光を使用する機会を提供しています。ここで、我々は、彼らが嗅球に到達する前にRMSの神経芽細胞の時間的に制限されたコホートにおけるウイルス発現するChannelrhodopsin2（ChR2）- YFPへの一連の手順を提示し、成人生まれのNEになるurons。さらに、我々はChR2発現ニューロンの in vivo刺激で慢性のLEDミニチュアを移植し、キャリブレーションする方法を示します。
Protocol
Discussion
Optogeneticツールは、最近、嗅覚系における成人生まれたニューロンを含む選択的な神経集団、上の私たちのコントロールを増加している。ここでは、成人生まれのニューロンの特定の集団にChR2 – YFPの発現レンチウイルスベクターの定位注射を行う方法について説明します。注意深く期間ポスト噴射を監視することによって、我々は相対的に均質年齢の成人生まれのニューロンの集団の活動を…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、の"ERA – NET NEURON"のフレームで"ANR – 09 – neuro -の異形004"エコールデ神経科学パリ（ENP）、アジャンス国立デラルシェルシュ、"ノヴァーリス- Taitbout"生命保険会社によってサポートされていました欧州委員会によるFP7のプログラム、"財団流動アラカルトルシェルシュMedicale"、Letten財団とパスツール財団。
Materials
| Material | Company | Catalogue No. |
| Ketamine | Merial | Imalgène 1000 |
| Xylazine | Bayer Health Care | Rompum 0.2% |
| Pipette Puller | Sutter | P-97 |
| Glass Capillaries (3.5″) | Drummond Scientific | 3-000-203-G/X |
| Nanoject II Microinjector | Drummond Scientific | 3-000-204 |
| High speed surgical drill | Fine Science Tools | 18000-17 |
| Micro Drill Steel Burrs 0.7mm tip diameter | Fine Science Tools | 19008-07 |
| LED CMS blue 4.6 W | OSRAM | LBW5SN |
| Female electrical connector (2.54 mm) | Fischer Elektronik | BL5.36Z |
| Current controller for LED (max: 1A) | A1W Electronik | HKO-KL50-1000 |
| Pulse generator | AMPI | Master-8 |
| Optical power meter | Thor Labs | PM100 |
| Cyanoacrylate adhesive | Loctite | 454 |
| Polycarboxylate cement (first layer cement) | Septodont | Selfast (#0068Q) |
| Methacrylate cement (second layer cement) | GC InternationalCorp. | Unifast Trad – Liquid (#339292) Unifast Trad – Powder (#339114) |
| Carprofen | Pfizer | Rimadyl |
References
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