Summary

Selettiva trasduzione virale di neuroni olfattivi per adulti nati per cronica In vivo Optogenetic Stimolazione

Published: December 28, 2011
doi:

Summary

I neuroni adulti, nato del bulbo olfattivo può essere controllato tramite optogenetically Channelrhodopsin2 che esprimono iniezione lentivirali nel flusso migratorio rostrale e fotostimolazione cronica con una miniatura impiantato LED.

Abstract

Interneuroni locali sono continuamente rigenerati nel bulbo olfattivo di roditori adulti 1-3. In questo processo, chiamato neurogenesi adulta, le cellule staminali neurali nelle pareti del ventricolo laterale danno luogo a neuroblasti che migrano per diversi millimetri lungo il flusso migratorio rostrale (RMS) per raggiungere e incorporare nel bulbo olfattivo. Per studiare le diverse fasi e l'impatto di adulti nati integrazione dei neuroni preesistenti in circuiti olfattiva, è necessario etichettare in modo selettivo e manipolare l'attività di questa specifica popolazione di neuroni. Il recente sviluppo delle tecnologie optogenetic offre l'opportunità di usare la luce per attivare appunto questo gruppo specifico di neuroni senza intaccare i neuroni circostanti 4,5. Qui vi presentiamo una serie di procedure per viralmente esprimere Channelrhodopsin2 (ChR2)-YFP in una coorte temporalmente ristretto di neuroblasti in RMS prima di raggiungere il bulbo olfattivo e diventare adulto-nato neurons. Inoltre, ci mostrano come impianto e calibrare una miniatura a LED per la stimolazione cronica in vivo di ChR2-esprimere i neuroni.

Protocol

1. Stereotassica iniezioni Il virus usato in questi esperimenti è una replica con deficit di vettori lentivirali basati sul virus HIV per esprimere Channelrhodopsine2-YFP (gialla proteina fluorescente) fusione costruire guidata da un promotore sinapsina 6. Il plasmide è stato generosamente forniti da K. Deisseroth 's di ricerca del gruppo ( http://www.stanford.edu/group/dlab/optogenetics/index.html ). Lentivirus possono …

Discussion

Strumenti Optogenetic hanno recentemente aumentato il nostro controllo sulle popolazioni di neuroni selettivi, tra cui i neuroni adulti nati nel sistema olfattivo. Qui si descrivono come eseguire una iniezione stereotassica di un vettore lentivirus che esprimono ChR2-YFP in una specifica popolazione di adulti nati neuroni. Con un attento monitoraggio del periodo post-iniezione, siamo in grado di analizzare e manipolare l'attività di una coorte di adulti nati i neuroni con un età relativa omogenea.

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Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Questo lavoro è stato sostenuto dalla compagnia di assicurazione sulla vita "Novalis-Taitbout", Ecole des Neurosciences de Paris (PEV), l'Agence Nationale de la Recherche "ANR-09-Neur-004", nella cornice di "NEURON ERA-NET" di 7 ° PQ dalla Commissione Europea, "Fondazione pour la Recherche Medicale", la Fondazione Letten e la Fondazione Pasteur.

Materials

Material Company Catalogue No.
Ketamine Merial Imalgène 1000
Xylazine Bayer Health Care Rompum 0.2%
Pipette Puller Sutter P-97
Glass Capillaries (3.5″) Drummond Scientific 3-000-203-G/X
Nanoject II Microinjector Drummond Scientific 3-000-204
High speed surgical drill Fine Science Tools 18000-17
Micro Drill Steel Burrs 0.7mm tip diameter Fine Science Tools 19008-07
LED CMS blue 4.6 W OSRAM LBW5SN
Female electrical connector (2.54 mm) Fischer Elektronik BL5.36Z
Current controller for LED (max: 1A) A1W Electronik HKO-KL50-1000
Pulse generator AMPI Master-8
Optical power meter Thor Labs PM100
Cyanoacrylate adhesive Loctite 454
Polycarboxylate cement (first layer cement) Septodont Selfast (#0068Q)
Methacrylate cement (second layer cement) GC InternationalCorp. Unifast Trad – Liquid (#339292)
Unifast Trad – Powder (#339114)
Carprofen Pfizer Rimadyl

References

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Cite This Article
Lepousez, G., Alonso, M., Wagner, S., Gallarda, B. W., Lledo, P. Selective Viral Transduction of Adult-born Olfactory Neurons for Chronic in vivo Optogenetic Stimulation. J. Vis. Exp. (58), e3380, doi:10.3791/3380 (2011).

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