Induzione di Graft-versus-host disease e<em> In Vivo</em> T monitoraggio cellulare Utilizzando un MHC-abbinato modello murino
Summary
Murine trapianto di midollo osseo è una tecnica ampiamente utilizzata per studiare i meccanismi immunologici che regolano graft-versus-host disease negli esseri umani. La capacità di monitorare il traffico delle cellule T modelli<em> In vivo</em> Consente per l'analisi dettagliata dello sviluppo e la perpetuazione delle risposte delle cellule T durante la graft-versus-host disease.
Abstract
Graft-versus-host disease (GVHD) è la barriera che limita l'ampio utilizzo di trapianto di midollo osseo come terapia curativa per una serie di carenze ematologiche. GVHD è causata da cellule T mature alloreattive presenti nel trapianto midollo osseo che sono infuse nel ricevente e causare danni agli organi di accoglienza. Tuttavia, nei topi, cellule T deve essere aggiunto al inoculo midollo osseo a causare GVHD. Sebbene un ampio lavoro è stato fatto per caratterizzare le risposte delle cellule T dopo trapianto, bioluminescente tecnologia di imaging è un metodo non invasivo per monitorare il traffico delle cellule T modelli in vivo.
A seguito di irradiazione letale, topi riceventi sono trapiantati con cellule del midollo osseo e splenociti di topi donatori. Sottopopolazioni di cellule T da L2G85.B6 (topi transgenici che esprimono costitutivamente luciferasi) sono incluse nel trapianto. Da trapiantare solo alcune sottopopolazioni di cellule T, è in grado di monitorare specifici sottogruppi di cellule T in vivo,e in base alla loro posizione, sviluppare ipotesi sul ruolo di specifici sottogruppi di cellule T nel promuovere la GVHD in vari momenti. A intervalli predeterminati dopo il trapianto, topi riceventi vengono esposte con una Xenogen IVIS camera CCD. L'intensità della luce può essere quantificato utilizzando il software Image Vivere per generare una pseudo-immagine a colori in base all'intensità fotone (rosso = alta intensità, viola intensità = bassa).
Tra 4-7 dopo il trapianto giorni, topi riceventi cominciano a mostrare segni clinici di GVHD. Cooke et al. 1 messo a punto un sistema di valutazione per quantificare la progressione della malattia in base al destinatario pelliccia trama topi, l'integrità della pelle, attività, perdita di peso, e la postura. I topi sono segnati tutti i giorni, e l'eutanasia quando diventano moribondi. Topi riceventi diventano in genere moribondo 20-30 giorni dopo il trapianto.
Modelli murini sono strumenti preziosi per lo studio della immunologia di GVHD. Selettivamente il trapianto delle cellule T sottoinsiemi particolare alminimi per l'identificazione accurata dei ruoli ogni sottoinsieme gioca. Non invasivo di monitoraggio risposte delle cellule T in vivo aggiunge un ulteriore livello di valore per i modelli murini GVHD.
Protocol
Discussion
Il protocollo per indurre GVHD nei topi qui presentato rappresenta un modello clinicamente rilevante di GVHD murino. Fondato da Berger et al. Nel 1994, il C57Bl / 6 in combinazione ceppo BALB.B è MHC-abbinato, con una mortalità GVHD mediata da CD4, CD8 dipendenti effettori T 2, molto simili allo scenario clinico più comune 3. E 'noto che trapiantando cellule T CD8 sola non causa GVHD in questo modello, tuttavia, la progressione della malattia è significativamente peggiore quando si…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Siamo in debito con Alice Gaughan e-Jiao Jing Wang cui eccellente supporto tecnico, apporto intellettuale, e sostegno morale hanno contribuito a spostare in avanti questi studi. Questi studi sono stati sostenuti dalla concessione NIH AI036532 a GAH.
Materials
| Name of Reagent | Company | Catalogue Number | Comments |
| RPMI 1640 | Invitrogen | 12633-012 | |
| Fetal Calf Serum | Invitrogen | 10439016 | |
| 40 μM Cell Strainer | BD Biosciences | 352340 | |
| CD3e-Biotin | Miltenyi Biotech | 130-093-021 | |
| Anti-Biotin Microbeads | Miltenyi Biotech | 130-091-147 | |
| CD8a Microbeads | Miltenyi Biotech | 130-049-401 | Used to deplete CD8 T cells from spleen. |
| CD8a Purification Antibody Cocktail | Miltenyi Biotech | 130-095-236 | Used to purify CD8 T cells from spleen. |
| D-Luciferin | Caliper Life Sciences | 122796 |
References
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