Индукционная трансплантат против хозяина и<em> В Vivo</em> Т-клеток Мониторинг Использование MHC соответствием мышиной модели
Summary
Мышиные трансплантации костного мозга является широко используемым методом для изучения иммунологических механизмов, регулирующих трансплантат против хозяина заболевания у людей. Возможность мониторинга T моделей торговли клетки<em> В естественных условиях</em> Позволяет для детального анализа развития и увековечения Т-клеточные реакции во время трансплантат против хозяина.
Abstract
Трансплантат против хозяина (РТПХ) является ограничивающим барьером для широкого использования трансплантации костного мозга в качестве лечебной терапии для различных гематологических недостатков. GVHD вызвано аллореактивных зрелых Т-клеток, присутствующих в трансплантат костного мозга, которые переплетаются в получателе и привести к повреждению принимающих органов. Тем не менее, у мышей, Т-клетки должны быть добавлены к посевной костного мозга, чтобы вызвать РТПХ. Хотя большая работа была проделана для характеристики Т-клеточного ответа после трансплантации, биолюминесцентные технологий визуализации является неинвазивным методом контроля T модели ячейки торговли в естественных условиях.
После смертельного облучения, получатель мышам трансплантировали клетки костного мозга и селезенки мышей-доноров. Т-клеток подмножества из L2G85.B6 (трансгенных мышей, которые конструктивно выражать люциферазы) включены в пересадке. По пересадке только определенные подмножества T клетки, один в состоянии отслеживать специфические Т-клетки подмножеств в естественных условиях,и на основе их местоположения, разработка гипотез о роли специфических Т подмножеств ячейки в развитии РТПХ в различные моменты времени. На заданный после пересадки интервалы, получатель мышей загружаются использованием Xenogen ИВИС CCD камера. Интенсивность света может быть определена количественно с помощью программного обеспечения живой образ, чтобы создать псевдо-цветное изображение на основе фотонов света (красный = высокая интенсивность, фиолетовый = низкая интенсивность).
Между 4-7 дней после пересадки, получатель мышей начинают проявляться клинические признаки РТПХ. Кук и др. 1. Разработана система баллов для количественной оценки прогрессирования заболевания на основе меха получателя мышей текстуры, целостность кожи, активность, потеря веса, и осанка. Мыши, забитых в день, и эвтаназии, когда они становятся умирающей. Мыши-реципиенты обычно становятся умирающей 20-30 дней после пересадки.
Мышиной модели являются ценными инструментами для изучения иммунологии РТПХ. Выборочно пересадка частности Т-клеток подмножества др.минимумы тщательное определение роли каждого подмножества играет. Неинвазивного отслеживания Т-клеточные реакции в естественных добавляет еще один слой ценность для мышиных моделях РТПХ.
Protocol
Discussion
Протокол для стимулирования РТПХ у мышей, представленные здесь представляет собой клинически значимые модели мышиной РТПХ. Первоначально установленный Berger и соавт. В 1994 году, C57Bl / 6 в комбинации штамм BALB.B является MHC-соответствие с РТПХ смертности опосредовано CD4 зависимым, CD8 Т-эфф…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Мы в долгу перед Алисой Gaughan и Цзяо-Ван Цзин чьи выдающиеся технической поддержки, интеллектуальный вклад, и моральная поддержка сыграли важную роль в продвижении этих исследований вперед. Эти исследования были поддержаны NIH грант AI036532 в Гах.
Materials
| Name of Reagent | Company | Catalogue Number | Comments |
| RPMI 1640 | Invitrogen | 12633-012 | |
| Fetal Calf Serum | Invitrogen | 10439016 | |
| 40 μM Cell Strainer | BD Biosciences | 352340 | |
| CD3e-Biotin | Miltenyi Biotech | 130-093-021 | |
| Anti-Biotin Microbeads | Miltenyi Biotech | 130-091-147 | |
| CD8a Microbeads | Miltenyi Biotech | 130-049-401 | Used to deplete CD8 T cells from spleen. |
| CD8a Purification Antibody Cocktail | Miltenyi Biotech | 130-095-236 | Used to purify CD8 T cells from spleen. |
| D-Luciferin | Caliper Life Sciences | 122796 |
References
- Cooke, K. R. An experimental model of idiopathic pneumonia syndrome after bone marrow transplantation: The roles of minor H antigens and endotoxin. Blood. 88, 3230-3239 (1996).
- Berger, M. T cell subsets involved in lethal graft-versus-host disease directed to immunodominant minor histocompatibility antigens. Transplantation. 57, 1095-1102 (1994).
- Nimer, S. D. Selective depletion of CD8+ cells for prevention of graft-versus-host disease after bone marrowtransplantation. A randomized controlled trial. Transplantation. 57, 82-87 (1994).
- Korngold, R., Sprent, J. Surface markers of T cells causing lethal graft-vs-host disease to class I vs class II H-2 differences. Journal of Immunology. 135, 3004-3010 (1985).
- Cao, Y. A. Molecular imaging using labeled donor tissues reveals patterns of engraftment, rejection, and survival in transplantation. Transplantation. 80, 134-139 (2005).
- Asady, R. E. l. TGF-{beta}-dependent CD103 expression by CD8(+) T cells promotes selective destruction of the host intestinal epithelium during graft-versus-host disease. J. Exp. Med. 201, 1647-1657 (2005).
- Larson, R. S., Springer, T. A. Structure and function of leukocyte integrins. Immunol Rev. 114, 181-217 (1990).
- Karecla, P. I. Recognition of E-cadherin on epithelial cells by the mucosal T cell integrin alpha M290 beta 7 (alpha E beta 7). Eur. J. Immunol. 25, 852-856 (1995).
- Cepek, K. L. Adhesion between epithelial cells and T lymphocytes mediated by E-cadherin and the alpha E beta 7 integrin. Nature. 372, 190-193 (1994).
- Malarkannan, S. The molecular and functional characterization of a dominant minor H antigen, H60. J. Immunol. 161, 3501-3509 (1998).
