Graft-versus-host hastalığı indüksiyonu ve<em> In Vivo</emBir MHC-eşlemeli murin Model Kullanma> T Hücre İzleme
Summary
Mürin kemik iliği nakli insanlarda graft-versus-host hastalığı yöneten immünolojik mekanizmalarla çalışmak için yaygın olarak kullanılan bir tekniktir. T hücre trafiğini modellerini izlemek için yeteneği<em> In vivo</em> Graft-versus-host hastalığı sırasında T hücre yanıtlarının geliştirilmesi ve idamesi ayrıntılı analizini sağlar.
Abstract
Graft-versus-host hastalığı (GVHH) hematolojik eksiklikleri çeşitli için küratif bir tedavi olarak kemik iliği nakli geniş kullanımı sınırlayıcı engeldir. GVHH alıcı infüze edilir kemik iliği greft mevcut olgun alloreactive T hücrelerinin neden olduğu ve ana organlara zarar edilmektedir. Bununla birlikte, farelerde, T hücreleri GVHD neden olduğu kemik iliği inokulum eklenmesi gerekir. Kapsamlı çalışmalar T hücre yanıtlarını transplantasyon sonrası karakterize yapılmış olmasına rağmen, bioluminescent görüntüleme teknolojisi in vivo T hücre trafiğini modellerini izlemek için bir non-invaziv bir yöntemdir.
Ölümcül radyasyon ardından, alıcı fareler donör farelerden alınan kemik iliği hücreleri ve dalak ile nakledilmektedir. L2G85.B6 (yapısal olarak ifade eden transgenik farelerde lusiferaz) alınan T-hücre alt nakli dahil edilmiştir. Sadece belirli T hücre alt nakli olarak, bir in vivo özgül T hücre alt izleyebilirve yere göre, değişik zaman noktalarında GVHD teşvik spesifik T hücre alt gruplarının rolü ile ilgili hipotezler geliştirmek. Önceden belirlenen aralıklarla transplantasyon sonrası anda, alıcı fareler bir Xenogen IVIS CCD kamera kullanarak görüntülü. Işık yoğunluğu foton yoğunluğu (kırmızı = yüksek yoğunluklu, mor = düşük yoğunluklu) dayalı bir pseudo-color görüntü oluşturmak için Yaşayan Image yazılımı kullanılarak belirlenebilir.
4-7 gün transplantasyon sonrası arasında, alıcı fareler GVHH klinik belirtileri göstermeye başlayabilir. Cooke ve ark. 1 alıcı fareler kürk, doku, deri bütünlüğü, aktivite, kilo kaybı ve duruş esas hastalığın ilerlemesini ölçmek için bir puanlama sistemi geliştirmiştir. Fare günlük attı, ve can çekişen olunca ötenazi uygulanır. Alıcı fareler genellikle 20-30 gün transplantasyon sonrası can çekişmekte.
Sıçan modellerinde GVHH immünoloji incelemek için değerli araçlardır. Seçerek özellikle T hücre alt ark nakliHer bir alt kümeye oynar rolleri dikkatli belirlenmesi için alçak. Non-invaziv in vivo T hücre yanıtları izleme murin GVHH modelleri değeri başka bir katman ekler.
Protocol
Discussion
Burada sunulan farelerde GVHD uyarılacak protokolü murin GVHH klinik açıdan uygun bir modeli temsil eder. Başlangıçta Berger ve arkadaşları tarafından kurulmuştur. 1994 yılında, BALB.B gerginlik kombinasyon içine C57BL / 6 bağımlı CD4, en sık görülen klinik senaryo 3 çok benzer CD8 T etkileyiciler 2, aracılık GVHH mortalite ile, MHC-eşleştirilmiş olduğunu. Tek başına CD8 T hücre nakli bu modelde GVHD neden olmadığı bilinmektedir, ancak hastalığı…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Biz kimin üstün teknik destek, entelektüel girdi ve manevi destek öncesinde bu çalışmalarda hareket etkili olmuştur Alice Gaughan ve Jiao-Jing Wang borçluyuz. Bu çalışmalar GAH için NIH hibe AI036532 tarafından desteklenmiştir.
Materials
| Name of Reagent | Company | Catalogue Number | Comments |
| RPMI 1640 | Invitrogen | 12633-012 | |
| Fetal Calf Serum | Invitrogen | 10439016 | |
| 40 μM Cell Strainer | BD Biosciences | 352340 | |
| CD3e-Biotin | Miltenyi Biotech | 130-093-021 | |
| Anti-Biotin Microbeads | Miltenyi Biotech | 130-091-147 | |
| CD8a Microbeads | Miltenyi Biotech | 130-049-401 | Used to deplete CD8 T cells from spleen. |
| CD8a Purification Antibody Cocktail | Miltenyi Biotech | 130-095-236 | Used to purify CD8 T cells from spleen. |
| D-Luciferin | Caliper Life Sciences | 122796 |
References
- Cooke, K. R. An experimental model of idiopathic pneumonia syndrome after bone marrow transplantation: The roles of minor H antigens and endotoxin. Blood. 88, 3230-3239 (1996).
- Berger, M. T cell subsets involved in lethal graft-versus-host disease directed to immunodominant minor histocompatibility antigens. Transplantation. 57, 1095-1102 (1994).
- Nimer, S. D. Selective depletion of CD8+ cells for prevention of graft-versus-host disease after bone marrowtransplantation. A randomized controlled trial. Transplantation. 57, 82-87 (1994).
- Korngold, R., Sprent, J. Surface markers of T cells causing lethal graft-vs-host disease to class I vs class II H-2 differences. Journal of Immunology. 135, 3004-3010 (1985).
- Cao, Y. A. Molecular imaging using labeled donor tissues reveals patterns of engraftment, rejection, and survival in transplantation. Transplantation. 80, 134-139 (2005).
- Asady, R. E. l. TGF-{beta}-dependent CD103 expression by CD8(+) T cells promotes selective destruction of the host intestinal epithelium during graft-versus-host disease. J. Exp. Med. 201, 1647-1657 (2005).
- Larson, R. S., Springer, T. A. Structure and function of leukocyte integrins. Immunol Rev. 114, 181-217 (1990).
- Karecla, P. I. Recognition of E-cadherin on epithelial cells by the mucosal T cell integrin alpha M290 beta 7 (alpha E beta 7). Eur. J. Immunol. 25, 852-856 (1995).
- Cepek, K. L. Adhesion between epithelial cells and T lymphocytes mediated by E-cadherin and the alpha E beta 7 integrin. Nature. 372, 190-193 (1994).
- Malarkannan, S. The molecular and functional characterization of a dominant minor H antigen, H60. J. Immunol. 161, 3501-3509 (1998).
