Induksjon av transplantat-mot-vert-sykdom og<em> In Vivo</em> T Cell overvåking ved hjelp av en MHC-matched Murine Model
Summary
Murine benmargstransplantasjon er en mye brukt teknikk for å studere immunologiske mekanismer som styrer graft-versus-host sykdom hos mennesker. Muligheten til å overvåke T celle trafficking mønstre<em> In vivo</em> Tillater detaljert analyse av utviklingen og opprettholdelse av T celle responser under graft-versus-host sykdom.
Abstract
Transplantat-mot-vert-sykdom (GVHD) er den begrensende barriere til allsidig bruk av benmargstransplantasjon som kurativ terapi for en rekke hematologiske mangler. GVHD er forårsaket av modne alloreactive T-celler til stede i benmargen pode som er tilført i mottakeren og skade vert organer. Men i mus, må T-celler legges til benmargen inokulatet å føre GVHD. Selv om omfattende arbeid har blitt gjort for å karakterisere T celle responser etter transplantasjon, er bioluminescent bildeteknologi en ikke-invasiv metode for å overvåke T celle trafficking mønstre in vivo.
Etter dødelig bestråling, er mottaker mus transplantert med benmargceller og splenocyttene fra donor mus. T celle undergrupper fra L2G85.B6 (transgene mus som konstitutivt uttrykker luciferase) er inkludert i transplantasjon. Ved kun transplantere visse T-celle-undergrupper, er man i stand til å spore spesifikke T celle undergrupper in vivo,og basert på deres sted, utvikle hypoteser for den rolle spesifikke T celle undergrupper i fremme GVHD ved forskjellige tidspunkter. På forhåndsbestemte intervaller etter transplantasjon, er mottaker mus avbildes ved hjelp av en Xenogen IVIS CCD-kamera. Lysintensiteten kan kvantifiseres ved hjelp levende bilde programvare for å generere en pseudo-fargebilde basert på foton intensitet (rød = høy intensitet, fiolett = lav intensitet).
Mellom 4-7 dager etter transplantasjon, mottaker mus begynner å vise kliniske tegn på GVHD. Cooke et al. 1 utviklet et poengsystem for å kvantifisere sykdomsprogresjon basert på mottakeren mus pels tekstur, hud integritet, aktivitet, vekttap, og holdning. Mus scoret daglig, og avlives når de blir døende. Mottaker mus generelt blitt døende 20-30 dager etter transplantasjon.
Murine modeller er verdifulle verktøy for å studere immunologi GVHD. Selektivt transplantere bestemt T-celle undergrupper allows for forsiktig identifisering av rollene hver undergruppe spiller. Non-invasiv sporing T celle responser in vivo legger et lag av verdi til murine GVHD modeller.
Protocol
Discussion
Protokollen for å indusere GVHD hos mus som presenteres her representerer en klinisk relevant modell av murine GVHD. Opprinnelig etablert av Berger et al. I 1994, er den C57BL / 6 i BALB.B belastning kombinasjon MHC-matchet, med GVHD dødelighet mediert av CD4 avhengige, CD8 T effektbokser 2, høyt ligner den vanligste kliniske scenario 3. Det er kjent at transplantasjonen CD8 T-celler alene ikke forårsaker GvHD i denne modellen, men er sykdomsprogresjon signifikant verre når både CD4 …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Vi står i gjeld til Alice Gaughan og Jiao-Jing Wang som fremragende teknisk støtte, intellektuell input, og moralsk støtte var instrumental i å flytte disse studiene fremover. Disse studiene ble støttet av NIH stipend AI036532 til GAH.
Materials
| Name of Reagent | Company | Catalogue Number | Comments |
| RPMI 1640 | Invitrogen | 12633-012 | |
| Fetal Calf Serum | Invitrogen | 10439016 | |
| 40 μM Cell Strainer | BD Biosciences | 352340 | |
| CD3e-Biotin | Miltenyi Biotech | 130-093-021 | |
| Anti-Biotin Microbeads | Miltenyi Biotech | 130-091-147 | |
| CD8a Microbeads | Miltenyi Biotech | 130-049-401 | Used to deplete CD8 T cells from spleen. |
| CD8a Purification Antibody Cocktail | Miltenyi Biotech | 130-095-236 | Used to purify CD8 T cells from spleen. |
| D-Luciferin | Caliper Life Sciences | 122796 |
References
- Cooke, K. R. An experimental model of idiopathic pneumonia syndrome after bone marrow transplantation: The roles of minor H antigens and endotoxin. Blood. 88, 3230-3239 (1996).
- Berger, M. T cell subsets involved in lethal graft-versus-host disease directed to immunodominant minor histocompatibility antigens. Transplantation. 57, 1095-1102 (1994).
- Nimer, S. D. Selective depletion of CD8+ cells for prevention of graft-versus-host disease after bone marrowtransplantation. A randomized controlled trial. Transplantation. 57, 82-87 (1994).
- Korngold, R., Sprent, J. Surface markers of T cells causing lethal graft-vs-host disease to class I vs class II H-2 differences. Journal of Immunology. 135, 3004-3010 (1985).
- Cao, Y. A. Molecular imaging using labeled donor tissues reveals patterns of engraftment, rejection, and survival in transplantation. Transplantation. 80, 134-139 (2005).
- Asady, R. E. l. TGF-{beta}-dependent CD103 expression by CD8(+) T cells promotes selective destruction of the host intestinal epithelium during graft-versus-host disease. J. Exp. Med. 201, 1647-1657 (2005).
- Larson, R. S., Springer, T. A. Structure and function of leukocyte integrins. Immunol Rev. 114, 181-217 (1990).
- Karecla, P. I. Recognition of E-cadherin on epithelial cells by the mucosal T cell integrin alpha M290 beta 7 (alpha E beta 7). Eur. J. Immunol. 25, 852-856 (1995).
- Cepek, K. L. Adhesion between epithelial cells and T lymphocytes mediated by E-cadherin and the alpha E beta 7 integrin. Nature. 372, 190-193 (1994).
- Malarkannan, S. The molecular and functional characterization of a dominant minor H antigen, H60. J. Immunol. 161, 3501-3509 (1998).
