एक Bilayered Hydrogel इंजीनियरिंग ए एस सी भेदभाव नियंत्रण
Summary
इस प्रोटोकॉल स्टेम सेल की निहित क्षमता का उपयोग करने के लिए अपने आसपास के बाह्य मैट्रिक्स से क्यू लेने और कई phenotypes में अंतर प्रेरित करने पर केंद्रित है. इस तरीके पांडुलिपि हमारे और एक मॉडल एक bilayered hydrogel उपयोग, खूंटी आतंच और कोलेजन की रचना का वर्णन लक्षण वर्णन प्रदान करता है, के लिए एक साथ वसा व्युत्पन्न स्टेम सेल सह अंतर<sup> 1</sup>.
Abstract
पिछले कुछ वर्षों में प्राकृतिक पॉलिमर उनके मेजबान और biocompatibility के लिए इन विट्रो में और vivo में कोशिकाओं के साथ बातचीत करने की क्षमता की वजह से अधिक महत्व प्राप्त है, अनुसंधान का एक क्षेत्र है कि पुनर्योजी चिकित्सा में वादा धारण उपन्यास biomaterials और स्टेम सेल के मिश्रित उपयोग है. ऊतक इंजीनियरिंग के क्षेत्र में एक मौलिक रणनीति सेल समारोह के निर्देशन के लिए तीन आयामी पाड़ (उदाहरण के लिए, बाह्य मैट्रिक्स, hydrogels, माइक्रो / नैनो कणों decellularized) का उपयोग है. इस तकनीक की खोज से विकसित किया गया है कि कोशिकाओं को एक सब्सट्रेट पर जो वे का पालन कर सकते हैं की जरूरत है, पैदा करना, और उनके विभेदित सेलुलर phenotype और 2-3 समारोह व्यक्त. हाल ही में, यह भी निर्धारित किया गया है कि कोशिकाओं को न केवल इन substrates के पालन के लिए उपयोग करने के लिए, लेकिन यह भी बातचीत और मैट्रिक्स (उदाहरण के लिए, बाह्य मैट्रिक्स, ईसीएम) सब्सट्रेट 4 से cues ले. इसलिए, कोशिकाओं और scaffolds कि पारस्परिक संबंध हैऊतक विकास, संगठन, और अंतिम समारोह को नियंत्रित करता है. वसा व्युत्पन्न स्टेम सेल (ASCs) mesenchymal, गैर hematopoetic के स्टेम कोशिकाओं कि बहु – वंश भेदभाव एक्ज़िबिट और कोशिकाओं के एक तत्काल उपलब्ध स्रोत (यानी पूर्व के संवहनी endothelia और pericytes) के रूप में सेवा कर सकते हैं वसा ऊतकों में मौजूद हैं. हमारी परिकल्पना है कि वसा व्युत्पन्न स्टेम सेल phenotypes एक साथ bilayered 1 matrices में बस सह संवर्धन उन्हें अलग – अलग करने की ओर निर्देशित किया जा सकता है. हमारी प्रयोगशाला त्वचीय घाव भरने पर ध्यान केंद्रित है. यह अंत करने के लिए, हम प्राकृतिक, biomaterials से एक समग्र मैट्रिक्स, आतंच, मज्जा, और chitosan कि घाव त्वचीय विशिष्ट चिकित्सा ईसीएम पर्यावरण की विशेषताओं और कार्यों की नकल कर सकते हैं बनाया है.
Protocol
Discussion
ASCs अलगाव और विभिन्न प्रकार की कोशिकाओं की ओर अंतर करने की क्षमता के अपने आसानी के लिए अच्छी तरह से जाना जाता है. इस पांडुलिपि में वर्णित तकनीकों के साथ, हम कई biomatrices के लिए इन कोशिकाओं को एक साथ उजागर द्वारा …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
एस.एन. पिट्सबर्ग ऊतक इंजीनियरिंग पहल से एक Postdoctoral फैलोशिप अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था. DOZ जिनेवा फाउंडेशन से सम्मानित किया गया अनुदान द्वारा समर्थित है.
Materials
| Name of the reagent/equipment | Company | Catalogue number | Comments |
| Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) | Gibco | 14175 | Consumable |
| Fetal Bovine Serum | Hyclone | SH30071.03 | Consumable |
| Collagenase Type II | Sigma-Aldrich | C6685 | Consumable |
| 70-μm Nylon Mesh Filter | BD Biosciences | 352350 | Consumable |
| 100-μm Nylon Mesh Filter | BD Biosciences | 352360 | Consumable |
| MesenPRO Growth Medium System | Invitrogen | 12746-012 | Consumable |
| L-Glutamine | Gibco | 25030 | Consumable |
| CaCl2.2H2O | Sigma | C8106 | Consumable |
| T75 Tissue Culture Flask | BD Biosciences | 137787 | Consumable |
| Chitosan | Sigma-Aldrich | 448869 | Consumable |
| Acetic Acid | Sigma-Aldrich | 320099 | Consumable |
| N-Octanol | Acros Organics | 150630025 | Consumable |
| Sorbitan-Mono-Oleate | Sigma-Aldrich | S6760 | Consumable |
| Potassium Hydroxide | Sigma-Aldrich | P1767 | Consumable |
| Acetone | Fisher Scientific | L-4859 | Consumable |
| Ethanol | Sigma-Aldrich | 270741 | Consumable |
| Trinitro Benzenesulfonic Acid | Sigma-Aldrich | P2297 | Consumable |
| Hydrochloric Acid | Sigma-Aldrich | 320331 | Consumable |
| Ethyl Ether | Sigma-Aldrich | 472-484 | Consumable |
| 8-μm Tissue Culture Plate Inserts | BD Biosciences | 353097 | Consumable |
| 1.5-ml Microcentrifuge Tubes | Fisher | 05-408-129 | Consumable |
| MTT Reagent | Invitrogen | M6494 | Consumable |
| Dimethyl Sulfoxide | Sigma-Aldrich | D8779 | Consumable |
| Qtracker Cell Labeling Kit(Q Tracker 655) | Molecular probes | Q2502PMP | Consumable |
| Type 1 Collagen | Travigen | 3447-020-01 | Consumable |
| Sodium Hydroxide | Sigma-Aldrich | S8045 | Consumable |
| 12-Well Tissue Culture Plates | BD Biosciences | 353043 | Consumable |
| Fibrinogen | Sigma | F3879 | Consumable |
| Thrombin | Sigma | T6884 | Consumable |
| Benztriazole Derivative of Polyethylene | Sunbio | DE-034GS | Consumable |
| Tris Buffer Tablet (pH 7.6) | Sigma | T5030 | Consumable |
| Centrifuge | Eppendorf | 5417R | Equipment |
| Orbital Shaker | New Brunswick Scienctific | C24 | Equipment |
| Humidified Incubator with Air-5% CO2 | Thermo Scientific | Model 370 | Equipment |
| Overhead Stirrer | IKA | Visc6000 | Equipment |
| Magnetic Stirrer | Corning | PC-210 | Equipment |
| Vacuum Desiccator | – | – | Equipment |
| Particle Size Analyzer | Malvern | STP2000 Spraytec | Equipment |
| Water Bath | Fisher Scientific | Isotemp210 | Equipment |
| Spectrophotometer | Beckman | Beckman Coulter DU 800UV/Visible Spectrophotometer | Equipment |
| Vortex | Diagger | 3030a | Equipment |
| Microplate Reader | Molecular Devices | SpectraMax M2 | Equipment |
| Light/Fluorescence Microscope | Olympus | IX71 | Equipment |
| Confocal Microscope | Olympus | FV-500 Laser Scanning Confocal Microscope | Equipment |
| Scanning Electron Microscope | Carl Zeiss MicroImaging | Leo 435 VP | Equipment |
| Transmission Electron Microscope | JEOL | JEOL 1230 | Equipment |
References
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