B7-H1(PD-L1)とPD-1への結合は、腫瘍の微小環境における主要な腫瘍誘発免疫抑制信号を提供します。膵臓腺癌におけるB7-H1の発現と局在を特徴付けるための免疫組織化学的染色法はここで説明されます。
B7-H1/PD-L1、免疫調節細胞表面タンパク質のB7ファミリーのメンバーは、プログラム死1(PD、その受容体との相互作用を介して細胞性免疫応答の負の調節に重要な役割を果たしている-1)1,2。腫瘍細胞によるB7-H1の過剰発現は、黒色腫、神経膠芽腫、肺の癌、乳癌、大腸癌、卵巣癌、腎細胞を含むヒトの癌の数で注目されており、抗腫瘍損なうことが示されているTシャツを細胞免疫3-8。
最近では、膵臓腺癌組織によるB7-H1の発現は、潜在的な予後マーカー9,10として同定されている。さらに、膵臓癌のマウスモデルにおいて、B7-H1の封鎖は、抗腫瘍応答11を生成することが示されている。これらのデータは、潜在的な治療標的としてのB7-H1の重要性を示唆している。抗B7-H1の封鎖抗体が故にmulのための臨床試験で検証されています黒色腫と肺、結腸、腎臓、胃、膵臓癌を含む12のtipleヒト固形腫瘍。
最終的にはB7-H1標的療法の恩恵を受ける患者を識別できるようにするためには、B7-H1およびB7-H1の封鎖抗体による処置に対する患者の応答の発現と局在の相関関係を調査することが重要です。免疫組織化学を通してヒト膵臓腺癌組織におけるB7-H1の発現を調べると、この共抑制シグナル伝達分子は、腫瘍の微小環境における腫瘍免疫の抑制に寄与する方法のより良い理解を与える。チェンと同僚によって開発された抗B7-H1モノクローナル抗体(クローン5H1)は、ヒト腫瘍組織の複数のタイプ4,8の凍結切片で信頼性の高い染色結果を生成することが示されているが、パラフィン包埋されたスライド上の染色がするまで挑戦していた最近13から18。我々は、devがある膵臓腺癌組織のパラフィン包埋されたスライドの駆け落ちB7-H1染色プロトコール。ここで説明するB7-H1染色プロトコールは少し背景に、B7-H1の一貫性のある膜と細胞質染色を生成します。
凍結切片上のB7-H1の免疫組織化学的染色は、癌3,4の様々な先行研究で報告されている。しかし、臨床腫瘍サンプルは、通常、パラフィン包埋ブロックの形で提供されています。 5H1モノクローナル抗体は、より最近に正常腎細胞癌、子宮頚癌、膀胱癌、悪性黒色腫13から18を含むパラフィン包埋腫瘍組織の染色に応用されてきた。パラフィン包埋9,19または他のモノクロ?…
The authors have nothing to disclose.
EBは、KMB、とHXは均等に貢献しています。本研究では、消化器癌P50 CA062924、NIHのK23 CA148964、ラストガーテン財団、Viragh財団、ASCOの若手研究者賞は、NIH 5T32 CA0090701-28トレーニンググラント、ソルゴールドマン膵臓癌センター、国立膵臓FoundationのNCIの胞子によってサポートされていました。
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
CSA System | Dako | K1500 | Includes the following reagents mentioned in the protocol: peroxidase block, streptavidin-biotin complex, amplification reagent, streptavidin-HRP, and DAB substrate and chromogen |
Avidin/Biotin Blocking Kit | Vector | SP-2001 | |
Block ACE | Serotec | BUF029 | |
Biotin anti-mouse IgG1 | BD | 553441 | |
Mouse IgG1 K Isotype Control | eBioscience | 14-4714-85 | |
TBS(Tris-buffered saline), 10X | Cellgro | 46-012-CM | 10xTBS contains 80 g/L NaCl and 24.2 g/L Tirs; Diluted to 1X with ddH2O for washes; |
Tween 20 | Sigma-Aldrich | P1379 | 1 ml added to 1 L of 1X TBS to make TBST |
Target Retrieval, 20x | Celerus Wave | 014-3000-000 | Diluted to 1x with ddH2O |
190 Proof Ethyl Alcohol | Pharmco-Aaper | 111000190 | |
200 Proof Ethyl Alcohol | Pharmo-Aaper | 111000200 | |
Xylene | VWR | 95057-827 | |
Hematoxylin | Richard-Allan Scientific | 72804 | |
Cytoseal 60 | Richard-Allan Scientific | 8310-4 | |
Coverslips | Corning | 2940-245 | |
Humidity chamber | Sigma | H6644 | |
Table 1. Reagents and equipment. |