A coloração imuno-histoquímica de B7-H1 (PD-L1) na histológicos em parafina lâminas de tecido adenocarcinoma do pâncreas
Summary
B7-H1 (PD-L1) e a sua ligação ao PD-1 fornece um sinal induzida por tumor principal imunossupressor no microambiente do tumor. Uma técnica de coloração imuno-histoquímica para caracterizar a expressão e localização de B7-H1 em adenocarcinoma pancreático é descrito aqui.
Abstract
B7-H1/PD-L1, um membro da família B7 de imuno-regulação de superfície celular de proteínas, tem um papel importante na regulação negativa de respostas mediadas por células imunitárias através da sua interacção com o seu receptor, a morte programada-1 (DP -1) 1,2. A sobre-expressão de B7-H1 por células tumorais foi observado em vários cancros humanos, incluindo o melanoma, glioblastoma, e carcinomas do pulmão, mama, cólon, ovário e células renais, e tem sido mostrado para danificar anti-tumorais T- imunidade celular 3-8.
Recentemente, a expressão B7-H1 por tecidos de adenocarcinoma do pâncreas foi identificado como um potencial marcador de prognóstico 9,10. Além disso, o bloqueio de B7-H1, em um modelo de rato de cancro pancreático foi mostrado para produzir uma resposta anti-tumor 11. Estes dados sugerem a importância de B7-H1 como um potencial alvo terapêutico. Anticorpos anti-B7-H1 bloqueio são, portanto, está sendo testado em ensaios clínicos para multiple tumores sólidos humanos, incluindo melanoma e cancros do pulmão, do cólon, estômago, rim e pâncreas 12.
A fim de, eventualmente, ser capaz de identificar os doentes que irão beneficiar de B7-H1 terapias com alvo, é crítico para investigar a correlação entre a expressão e localização de B7-H1 e a resposta do paciente ao tratamento com os anticorpos B7-H1 bloqueio. Examinando a expressão de B7-H1 em tecidos pancreáticos humanos através de adenocarcinoma imunohistoquímica dará um melhor entendimento de como esta molécula de sinalização co-inibidor contribui para a supressão da imunidade antitumoral em microambiente do tumor. O anticorpo anti-B7-H1 monoclonal (clone 5H1), desenvolvido por Chen e colaboradores demonstrou produzir resultados fiáveis em criocortes de coloração de vários tipos de tecidos neoplásicos humanos 4,8, mas a coloração de lâminas embebidas em parafina tinha sido um desafio até Recentemente, 13-18. Temos devfugiu do protocolo de coloração B7-H1 para os slides incluídos em parafina de tecidos de adenocarcinoma do pâncreas. O protocolo de coloração B7-H1 descrito aqui produz a coloração das membranas e citoplasmática consistente de B7-H1 com pouco fundo.
Protocol
Representative Results
Discussion
A coloração imuno-histoquímica de B7-H1 em criocortes tem sido relatada em estudos anteriores para uma variedade de cancros 3,4. No entanto, as amostras de tumor clínicos geralmente só estão disponíveis sob a forma de blocos embebidos em parafina. O anticorpo monoclonal 5H1 mais recentemente tem sido aplicado com sucesso para a coloração de tecidos embebidos em parafina de tumores, incluindo carcinoma de células renais, carcinoma cervical, cancro da bexiga e melanoma 13-18. B7-H1 coloraç…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
EB, KMB, e HX contribuir igualmente. Este estudo foi financiado pelo NCI SPORE em Cânceres Gastrointestinais P50 CA062924, CA148964 NIH K23, Lustgarten Foundation, Viragh Foundation, ASCO Young Investigator Award, NIH 5T32 CA0090701-28 Formação Grant, Sol Goldman Centro de cancro do pâncreas, e da Fundação Nacional de Pâncreas.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| CSA System | Dako | K1500 | Includes the following reagents mentioned in the protocol: peroxidase block, streptavidin-biotin complex, amplification reagent, streptavidin-HRP, and DAB substrate and chromogen |
| Avidin/Biotin Blocking Kit | Vector | SP-2001 | |
| Block ACE | Serotec | BUF029 | |
| Biotin anti-mouse IgG1 | BD | 553441 | |
| Mouse IgG1 K Isotype Control | eBioscience | 14-4714-85 | |
| TBS(Tris-buffered saline), 10X | Cellgro | 46-012-CM | 10xTBS contains 80 g/L NaCl and 24.2 g/L Tirs; Diluted to 1X with ddH2O for washes; |
| Tween 20 | Sigma-Aldrich | P1379 | 1 ml added to 1 L of 1X TBS to make TBST |
| Target Retrieval, 20x | Celerus Wave | 014-3000-000 | Diluted to 1x with ddH2O |
| 190 Proof Ethyl Alcohol | Pharmco-Aaper | 111000190 | |
| 200 Proof Ethyl Alcohol | Pharmo-Aaper | 111000200 | |
| Xylene | VWR | 95057-827 | |
| Hematoxylin | Richard-Allan Scientific | 72804 | |
| Cytoseal 60 | Richard-Allan Scientific | 8310-4 | |
| Coverslips | Corning | 2940-245 | |
| Humidity chamber | Sigma | H6644 | |
| Table 1. Reagents and equipment. |
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