B7-H1 (PD-L1) och dess bindning till PD-1 tillhandahåller en stor tumör-inducerad immunosuppressiv signal i tumörens mikromiljö. En immunohistokemisk färgning teknik för att karakterisera uttryck och lokalisering av B7-H1 i pankreatiskt adenokarcinom beskrivs här.
B7-H1/PD-L1, en medlem av B7-familjen av immun-reglerande cell-ytproteiner, spelar en viktig roll vid negativ reglering av cell-medierade immunsvar genom dess interaktion med dess receptor, programmerad död-1 (PD -1) 1,2. Överexpression av B7-H1 av tumörceller har noterats i ett antal humana cancerformer, inklusive melanom, glioblastom, och karcinom i lunga, bröst, kolon, äggstock, och njurceller, och har visat sig försämra anti-tumör-T- cellsimmunitet 3-8.
Nyligen har B7-H1 expression genom vävnader pankreatiskt adenokarcinom identifierats som en potentiell prognostisk markör 9,10. Dessutom har blockad av B7-H1 i en musmodell för cancer i bukspottskörteln visats producera ett anti-tumörsvar 11. Dessa data tyder på vikten av B7-H1 som ett potentiellt terapeutiskt mål. Anti-B7-H1 blockad antikroppar därför testas i kliniska prövningar för multiple humana fasta tumörer, inklusive melanom och cancer i lunga, kolon, njure, mage och pankreas 12.
För att på sikt kunna identifiera de patienter som kommer att gynnas av B7-H1 inriktning behandlingar är det viktigt att undersöka sambandet mellan uttryck och lokalisering av B7-H1 och patientens svar på behandling med B7-H1 blockad antikroppar. Undersöka uttrycket av B7-H1 i mänskliga vävnader pankreas adenocarcinom genom immunohistokemi ger en bättre förståelse för hur detta samarbete hämmande signalmolekyl bidrar till förtryck av antitumörimmunitet i tumörens mikromiljö. Anti-B7-H1 monoklonal antikropp (klon 5H1) som utvecklats av Chen och medarbetare har visat sig ge tillförlitliga färgning resulterar i kryosnitt av flera typer av humana neoplastiska vävnader 4,8, men färgning på paraffininbäddade objektglas hade varit en utmaning tills nyligen 13-18. Vi har devrymt B7-H1 färgningsprotokollet för paraffininbäddade diabilder av vävnader i bukspottkörteln adenocarcinom. B7-H1 färgningsprotokollet beskrivs här ger konsekvent membranös och cytoplasmisk färgning av B7-H1 med lite bakgrund.
Immunohistokemisk färgning av B7-H1 på kryosnitt har rapporterats i tidigare studier för olika cancertyper 3,4. Men kliniska tumörprover är oftast bara tillgängliga i form av paraffininbäddade block. Den 5H1 monoklonala antikroppen har på senare tid framgångsrikt tillämpats på färgning av paraffininbäddade tumörvävnad, inklusive njurcellscancer, cervixcancer, blåscancer och melanom 13-18. B7-H1 färgning på paraffininbäddade 9,19 eller kryostaten 20 delar av …
The authors have nothing to disclose.
EB, KMB, och HX bidrar lika. Denna studie stöddes av NCI SPORE i gastrointestinal cancer P50 CA062924, NIH K23 CA148964, Lustgarten Foundation, Viragh Foundation, ASCO Young Investigator Award, NIH 5T32 CA0090701-28 Träning Grant, Sol Goldman bukspottkörtel Cancer Center och National Pancreas Foundation.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
CSA System | Dako | K1500 | Includes the following reagents mentioned in the protocol: peroxidase block, streptavidin-biotin complex, amplification reagent, streptavidin-HRP, and DAB substrate and chromogen |
Avidin/Biotin Blocking Kit | Vector | SP-2001 | |
Block ACE | Serotec | BUF029 | |
Biotin anti-mouse IgG1 | BD | 553441 | |
Mouse IgG1 K Isotype Control | eBioscience | 14-4714-85 | |
TBS(Tris-buffered saline), 10X | Cellgro | 46-012-CM | 10xTBS contains 80 g/L NaCl and 24.2 g/L Tirs; Diluted to 1X with ddH2O for washes; |
Tween 20 | Sigma-Aldrich | P1379 | 1 ml added to 1 L of 1X TBS to make TBST |
Target Retrieval, 20x | Celerus Wave | 014-3000-000 | Diluted to 1x with ddH2O |
190 Proof Ethyl Alcohol | Pharmco-Aaper | 111000190 | |
200 Proof Ethyl Alcohol | Pharmo-Aaper | 111000200 | |
Xylene | VWR | 95057-827 | |
Hematoxylin | Richard-Allan Scientific | 72804 | |
Cytoseal 60 | Richard-Allan Scientific | 8310-4 | |
Coverslips | Corning | 2940-245 | |
Humidity chamber | Sigma | H6644 | |
Table 1. Reagents and equipment. |