胎児のマウスモデルにおける生物活性剤の気管内投与のための新しい手術アプローチ
Summary
我々は、マウスの胎児への生物活性剤の気管内投与のための新規な外科的アプローチを開発しました。配達ルートは、一般的に使用される羊膜内の注射よりも胎児のマウス肺を標的にするより効率的です。この手順では、マウスモデルで説明されていない最新情報を持っています。
Abstract
細胞、遺伝子または薬理学的薬剤の胎児期の肺送達は、遺伝的および後天性疾患の様々な新たな治療戦略のための基礎を提供することができます。配信遺伝子の長期発現のための要件と先天性または遺伝性異常とは別に、短期的な遺伝子発現または薬理学的介入は、治療効果を達成するのに十分である、いくつかの非継承周産期の状態は、このための潜在的な将来の適応と考えられているアプローチの一種。短期的な出生前治療の適用のための候補疾患は、新生児呼吸窮迫症候群の1,2または新生児肺3の高酸素けがの原因となることがサーファクタントプロテインBの一過性新生児の欠乏である可能性があります。永久的な治療の訂正のための候補疾患は嚢胞性線維症（CF）4、界面活性剤の不備5、α1-アンチトリプシン欠損症6の遺伝的変異体である。
<Pクラス= "jove_content"は>一般的には、出生前の遺伝子治療の重要な利点は、このように個々に取り返しのつかない損傷を防止すること、患者の臨床症状の前に、あるいは、開発の早い段階で治療的介入を開始する機能です。胎児へのより効率的な遺伝子や幹細胞の伝達を可能にでき成体の臓器に比べて、さらに、胎児の器官は、細胞増殖の増加率を持っています。さらに、 子宮内遺伝子送達で個体の免疫系が完全に成熟していないときに行われます。したがって、正しいバージョンと非機能的か、または存在しないタンパク質の異種細胞または補充の移植は最近、携帯電話や遺伝子治療7の両方でケースであることが証明された細胞、ベクトルまたは導入遺伝子産物に対する免疫感作を起こすべきではありません。そこで本研究では、マウスを直接メートルの胎児気管をターゲットにする可能性を検討odel。この手順では、このようなウサギ、羊8、さらには臨床の現場9のような大きな動物モデルで使用されていますが、マウスモデルで前に実行されない日があります。例えば、CFなどの遺伝性疾患の胎児の遺伝子治療の可能性を検討する際に、マウスモデルでは、異なるためトランスジェニックマウス系統の広い空、十分に文書化された胚及び胎児の開発の最初のproof-of-conceptとしてあまり厳しく非常に便利です倫理的な規制、短い妊娠期間と大産仔数。
別のアクセスルートはイントラ羊水注入10-12、卵黄嚢の血管15,16または臍帯静脈17に（超音波ガイド下）肺内注射13,14及び静脈内投与を含む、げっ歯類の胎児の肺を標的に記載されている。我々の新規手術は直接できますマウス胎児気管に最適な薬剤を注入するために研究者を可能にする既存の技術18より気道へのより効率的な配信のため。
Protocol
1。理想の妊娠ステージを取得するためにマウスの交配タイムメイト妊娠NMRIマウスので、彼らは手術時（合計妊娠E19.5）妊娠18日目（E18）であること。手術前と後に、それらは通常の室温、水と固形飼料への無料アクセスを通常の昼光でフィルタトップケージに収容されています。 2。胎児の気管内（IT）の注入（図1） 最初の1.5 L /分でO 2</su…
Discussion
重要なステップ
- 彼らは子犬の豊富な数（平均産仔数14.4±1.8、独自のデータ）を持っているので、我々が利用することを選んだマウス系統はNMRIマウスであり、よく介入を容認し、良い母親の特性を持っています。
- あなただけそうしないと再配置、胎児の頭ではなく肩を公開するように子宮壁と胎児膜を通して巾着を置くことは重要なステップであるトラウマを引き起こすことな?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
MCとAVDPフランダースの科学技術によるイノベーションの促進のための研究所からの助成金（IWT-ブラーンデレン）でサポートされているポスドクです。 JTはUZルーベンから非常勤の臨床研究フェローシップ（KOOR）を保持します。 DVはKUルーベン、DBOF/10/062からの助成金によって支え博士研究員である。 MMDCはConselhoナシオナルデPesquisa電子Desenvolvimento（CNPq）とエラスムス·ムンドゥスからの助成金によって支え博士研究員である。研究助成金は、EC DIMI（LSHB-CT-2005から512146）によっておよびKUルーベンから in vivo分子イメージング研究グループ（IMIR） によって In、IWT-ブラーンデレンによって賄われていた。我々はrAAVベクター生産用プラスミドAAV6.2包装の彼らの親切なギフト用ジェームズM.ウィルソンによって設立UPennベクトルコアを承認したいと思います。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| NMRI mice | Janvier, Le Genest St Isle, France | ||
| Isoflurane | Isoba, Intervet / Schering-Plough Animal Health, Milton Keynes, UK | ||
| Prolene 6-0 | Ethicon, Groot Bijgaarden, Belgium | ||
| Vicryl 5-0 | Ethicon, Groot Bijgaarden, Belgium | ||
| 50 μl Hamilton Glass Syringe, Model 1710.5 TLLX SYR | Hamilton, Reno, NV, USA | 5495-20 | |
| 30G sharp needle | Hamilton, Reno, NV, USA | 7762-03 | |
| 2% xylocaine | AstraZeneca, Zoetermeer, The Netherlands |
References
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Cite This Article
Carlon, M. S., Toelen, J., da Cunha, M. M., Vidović, D., Van der Perren, A., Mayer, S., Sbragia, L., Nuyts, J., Himmelreich, U., Debyser, Z., Deprest, J. A Novel Surgical Approach for Intratracheal Administration of Bioactive Agents in a Fetal Mouse Model. J. Vis. Exp. (68), e4219, doi:10.3791/4219 (2012).