الموصوفة هنا هو<em> في الجسم الحي</em> التقنية لهياكل شبه الخلوية الصورة في حيوانات تعرضت لنقص الأكسجين باستخدام تدفق الغاز من خلال غرفة microincubation جنبا إلى جنب مع القرص الغزل المجهر متحد البؤر. هذا الأسلوب واضح ومباشر ومرنة بما يكفي لتناسب مجموعة متنوعة من المعلمات التجريبية ونظم النموذج.
وقد استخدم على نطاق واسع Caenorhabdits ايليجانس في دراسة مقاومة الإجهاد، والتي سهلت من الشفافية في مراحل الجنين والكبار فضلا عن توافر المسوخ الجينية والسلالات المحورة وراثيا معربا عن عدد لا يحصى من البروتينات الانصهار 1-4. وبالإضافة إلى ذلك، يمكن عرض العمليات الحيوية مثل البروتينات انقسام الخلايا باستخدام مراسل fluorescently المسمى. ويمكن تيسير دراسة الانقسام من خلال استخدام الوقت الفاصل بين التجارب في مختلف النظم بما في ذلك الكائنات سليمة، وبالتالي في وقت مبكر C. هي مناسبة تماما ايليجانس الجنين لهذه الدراسة. المقدمة هنا هي تقنية التصوير التي في الجسم الحي الفرعية الخلوية الهياكل استجابة لنقص الأكسجين (99.999٪ N 2، <جزء في المليون 2 O 2) الإجهاد من الممكن استخدام تدفق الغاز من خلال الإعداد بسيطة على المجهر رفيع المستوى. يتم استخدام غرفة microincubation بالتزامن مع تدفق غاز النيتروجين من خلال المجهر والقرص الغزل مبائرلخلق بيئة تسيطر عليها فيه ولا يمكن تصوير الحيوانات في الجسم الحي. باستخدام GFP الموسومة تويولين جاما وهيستون، يمكن رصد ديناميات واعتقال انقسام الخلايا قبل وأثناء وبعد التعرض للبيئة الأوكسجين المحرومين. نتائج هذه التقنية هي عالية الدقة والفيديو والصور المفصلة للهياكل الخلايا خلال blastomeres الأجنة تتعرض للحرمان الأكسجين.
الحرمان الأوكسجين ويعلق إحياء
على الرغم من أن التعرض للحرمان الأكسجين الحاد يمكن أن تكون قاتلة لبعض الكائنات الحية، بعض الكائنات الحية قادرة على البقاء على قيد الحياة التعرض لنقص الأكسجين. في حالة C. ايليجانس، بقاء التعرض نقص…
The authors have nothing to disclose.
نود أن نعرب عن تقديرنا لالمدخلات والتعليقات من أعضاء مختبر باديلا. وقدمت سلالات النيماتودا في هذا العمل من قبل مركز علم الوراثة Caenorhabditis، الذي يتم تمويله من قبل المركز الوطني لبحوث الموارد NIH (NCRR). نعترف ونشكر الدكتور لون تيرنبول للمساعدة التقنية مع المجهري متحد البؤر. وقد تم دعم هذا العمل من خلال منحة من مؤسسة العلوم الوطنية (NSF-IOS، والوظيفي) لPAP
Reagents/Equipment | Composition | ||
Hypochlorite solution | 0.7 g KOH, 12 ml 5% NaOCl, bring to 50 ml with ddH20 | ||
M9 buffer | 3 g KH2PO4, 11 g Na2HPO4, 5 g NaCl, 1 ml (1 M) MgSO4 per 1 L ddH2O | ||
Glass microscope slides | Fisher Scientific | 12-550-343 | 3″x1″x1.0 mm |
Round micro coverglass | Electron Microscopy Sciences | 72223-01 | 25 mm Diameter |
Halocarbon oil 700 | Sigma | H8898-100ml | |
Anesthetic | 0.5% tricaine, 0.05% tetramisole | ||
Leiden Closed Perfusion Microincubator | Harvard Apparatus | 650041 | |
UHP Nitrogen | Calgaz (Air Liquide) | >99.9990% N2 <2 ppm O2 | |
Plastic tubing | VWR | 89068-468 | 0.062″ ID x 0.125″ OD |
Spinning Disk Confocal Microscope | McBain Systems | Zeiss inverted optical microscope, epifluorescence illumination system, CSU-10 Yokogawa confocal scanner, Hamamatsu electron multiplier CCD camera. |