मानव दंत लुगदी स्टेम सेल के अलगाव विशेषता, और तुलनात्मक भेदभाव दो अलग अलग तरीकों का उपयोग करके स्थायी दांत से व्युत्पन्न
Summary
विधि या तो का उपयोग करके और मानव दंत लुगदी स्टेम सेल (hDPSCs) के अलगाव के लक्षण वर्णन वर्णित<strong> लुगदी के enzymatic पृथक्करण (डीपीएससी प्रवर्तन निदेशालय)</strong> या<strong> गूदा ऊतक explants से स्टेम कोशिकाओं का सीधा परिणाम (डीपीएससी ओग). तो द्वारा पीछा</strong><em> इन विट्रो में</em> ओडॉन्टोब्लास्ट में hDPSCs के दोनों प्रकार के तुलनात्मक भेदभाव.
Abstract
Introduction
स्टेम सेल किसी क्लोन से उत्पन्न होने वाला अथवा उससे बना हुआ है जो कोशिकाओं दो उल्लेखनीय विशेषताएं, बहु – शक्ति और आत्म नवीकरण 15 के रूप में जाना जाता है के अधिकारी कर रहे हैं. अलग replicative potencies साथ सभी स्टेम कोशिकाओं के अलावा, प्रसवोत्तर स्टेम कोशिकाओं के रूप में दंत स्टेम कोशिकाओं को उनकी पहुंच, plasticity, और अन्य वयस्क स्टेम कोशिकाओं 16 के साथ तुलना में उच्च proliferative क्षमता की वजह से हाल के वर्षों में ध्यान आकृष्ट किया है. दिलचस्प है, mesenchymal स्टेम सेल करने के लिए समान है, दंत लुगदी स्टेम कोशिकाओं अनुयायी किसी क्लोन से उत्पन्न होने वाला अथवा उससे बना हुआ है जो कोशिकाओं में एकाधिक भेदभाव mesenchyme क्षमता और / या गैर mesenchyme प्रजातियों, दोनों इन विट्रो में और vivo में हैं 1-8,17,18 DPSCs द्वारा की पहचान कर रहे हैं. उनके नकारात्मक hematopoietic प्रतिजनों की अभिव्यक्ति (जैसे, CD45, CD34, CD14), और CD90 की सकारात्मक अभिव्यक्ति, CD29, CD73, CD105, CD44 और stro 1 19,20.
न्यूनतम दर्द और रुग्णता के साथ आराम से प्राप्त संभावित एक valu के रूप में मानव DPSCsMSCs के लिए सक्षम स्रोत अस्थि मज्जा mesenchymal स्टेम 21 कोशिकाओं के रूप में आम सूत्रों का कहना है, की तुलना में. सामान्य में, DPSCs या तो परिणाम विधि, यानी, लुगदी ऊतक explants (डीपीएससी ओग) 22-24, और / या एंजाइमी (डीपीएससी ईडी) पाचन 4,6,25 द्वारा स्टेम कोशिकाओं के प्रवास से पृथक किया गया है. पिछले अध्ययनों से पता चला है कि अलगाव विधि और संस्कृति शर्तों के तहत इन विट्रो 26,27 मार्ग में विभिन्न आबादी या प्रजातियों को प्रेरित कर सकते हैं. , स्थायी दांत (pDPSCs) के मामले में हुआंग एट अल से पता चला है कि enzymatic पचा pDPSCs पार कर दी DPSCs की तुलना में उच्च प्रसार की क्षमता है 26 इसके अलावा, पर्णपाती दांत (dDPSCs) के मामले में, यह प्रदर्शन किया गया. कि stro-1 और CD34 मार्करों dDPSC-ओग के साथ तुलना में अधिक dDPSC प्रवर्तन निदेशालय में व्यक्त की है. इसके अलावा, dDPSC प्रवर्तन निदेशालय परिभाषित मध्यम / osteo odonto में उच्च खनिज दर प्रदर्शित 27 इसलिए r में DPSCs की बकाया संभावित कारण,egenerative दवा, और अधिक अध्ययन संभव विभिन्न आबादी है जो अलग अलगाव तरीकों से प्राप्त कर रहे हैं की बेहतर समझ के लिए आवश्यक हो जाएगा.
यहाँ, यह लुगदी निकासी की प्रक्रिया को सुविधाजनक बनाने के लिए एक कदम दंत हीरे डिस्क का उपयोग करने के लिए लुगदी निकासी का आसान तरीका, शुरू करने का प्रयास किया गया था. इसके अलावा, मानव लुगदी व्युत्पन्न प्रवर्तन निदेशालय या ओग तरीकों को लागू करने से स्टेम कोशिकाओं के अलगाव के बाद, सामान्य और दो समूहों के बीच भेदभाव क्षमता गुण भी जांच की गई.
Protocol
Representative Results
Discussion
इस प्रोटोकॉल और दंत लुगदी से hDPSCs दो तरीकों, enzymatic पृथक्करण और लुगदी ऊतक explants से स्टेम कोशिकाओं का सीधा परिणाम का उपयोग कर के अलगाव के लक्षण वर्णन की प्रक्रिया का वर्णन करता है. इसके अलावा, इन कोशिकाओं के ओडॉन…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम कृतज्ञता उनके महत्वपूर्ण और अपने तकनीकी समर्थन के लिए डिस्कस श्री मोहम्मद रजा Khadem शरीफ के लिए डॉ. लीला Shakeri और डॉ. Aref Dournaei को स्वीकार करते हैं.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue or Lot. number | Comments (optional) |
| α-MEM | GIBCO | 11900-073 | |
| Collagenase type I | Sigma-Aldrich | C0130-100MG | |
| Dispase | GIBCO | 17105-041 | |
| Penicillin/streptomycin | GIBCO | 15140-122 | |
| Amphotericin B | GIBCO | 15290-018 | |
| Fetal Bovine serum defined (FBS) | HyClone | SH30070.03 | |
| L-ascorbic acid 2-phosphate | Sigma | A8960-5G | |
| L-glutamine | GIBCO | 25030-024 | |
| Dexamethasone | Sigma | D4902 | |
| β-Glycerol phosphate disodium salt hydrate, BioUltra | Sigma | G9422-100G | |
| Potassium phosphate monobasic | Sigma-Aldrich | P5655 | |
| Osteogenesis Assay Kit | Millipore | PS01802031 | |
| Mouse IgG2b-PE isotype control | BD pharmingen | 50808088029 | |
| FITC mouse IgG2b isotype control | BD pharmingen | 559532 | |
| FITC mouse IgG1 κ isotype | BD pharmingen | 11471471 | |
| FITC/PE mouse anti-human CD34/CD45 | BD pharmingen | 341071 | |
| PE anti-human CD146 | BD pharmingen | 550315 | |
| Monoclonal mouse anti-human CD90/FITC | Daka | 00034418 | |
| PE mouse anti-human CD73 | BD pharmingen | 550257 | |
| Anti-h CD105/Endoglin PE | BD pharmingen | FAB10971P | |
| PE mouse anti-human CD11b/Mac1 | BD pharmingen | 5553888 | |
| CD44 PE mouse anti human | BD pharmingen | 555479 | |
| Phosphate buffer Solution (PBS) | GIBCO | 003000 | |
| 70-μm cell strainer | Falcon | 352360 | |
| 0.2 μm syringe filter | Millex-GV | SLGV033RB | |
| 25 cm2 culture flask | Sigma-Aldrich | Z707481 | |
| EQUIPMENT | |||
| BD FACSCalibur | BD | 342975 | |
| multiskan microplate spectrophotometer | Thermo scientific | 51119200 | |
| Fleurcense Microscope | Olympus | ||
| Flowing Software version 2.3.1 |
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