Metoden er beskrevet isolering og karakterisering av menneskelig tannpulpa stamceller (hDPSCs) ved hjelp av enten<strong> Enzymatisk dissosiasjon av papirmasse (DPSC-ED)</strong> Eller<strong> Direkte resultat av stamceller fra pulpavevet explants (DPSC-OG). Deretter fulgt av</strong><em> In vitro</em> Sammenlignende differensiering av begge typer hDPSCs inn odontoblaster.
Stamceller er clonogenic celler som besitter to bemerkelsesverdige funksjoner, kjent som multi-styrke og selvfornyelse 15. Blant alle stamceller med ulike replicative potencies, har dental stamceller som de postnatal stamceller trukket oppmerksomhet de siste årene på grunn av sin tilgjengelighet, plastisitet, og høy proliferativ evne sammenlignet med andre voksne stamceller 16. Karakteristisk, ligner på stamceller, dental pulp stamceller er adherente clonogenic celler som har multippel differensiering kapasitet inn mesenchyme og / eller ikke-mesenchyme linjene, både in vitro og in vivo. 1-8,17,18 DPSCs identifiseres ved deres negative uttrykk for blodkreft antigener (f.eks CD45, CD34, CD14), og positive uttrykk for CD90, CD29, CD73, CD105, CD44 og STRO-1. 19,20
Enkel innhentet potensial med minimum smerte og sykelighet gjør menneskelige DPSCs som verdifullestand kilde MSCS forhold til ordinær kilder, for eksempel benmarg stamceller 21. Generelt har DPSCs blitt isolert ved enten utvekst metode, dvs. migrering av stamceller fra pulpavevet eksplanter (DPSC-OG) 22-24, og / eller ved enzymatisk fordøyelse (DPSC-ED) 4,6,25. Tidligere studier har vist at den isolasjon metoden og dyrkningsbetingelser kan indusere forskjellige populasjoner eller linjene under i vitro passasjer 26,27. I tilfelle av permanente tenner (pDPSCs), avslørte Huang et al at enzymatiske fordøyd pDPSCs har høyere spredning potensiale sammenlignet med de vokst DPSCs. 26 Videre, i tilfelle av melketenner (dDPSCs), ble det vist at STRO-1 & CD34 markører uttrykkes mer i dDPSC-ED sammenlignet med dDPSC-OG. I tillegg, viste dDPSC-ED høyere mineralisering rate i definerte osteo / odonto medium. 27 Derfor, på grunn av den enestående potensialet DPSCs i regenerative medisin, vil flere studier være nødvendig for bedre forståelse av mulige ulike populasjoner som er utledet fra ulike isolasjon metoder.
Her var det forsøk på å innføre enkel måte papirmasse ekstraksjon, ved å bruke en-trinns dental diamant disk å forenkle prosessen med papirmasse utvinning. Dessuten, etter isolering av humane papirmasse-avledede stamceller ved å bruke ED eller OG metoder ble generelle egenskaper og differensiering kapasitet mellom to grupper også undersøkt.
Denne protokollen beskriver prosessen med isolering og karakterisering av hDPSCs fra tannpulpa ved hjelp av to metoder, enzymatisk dissosiasjon og direkte resultat av stamceller fra pulpavevet explants. I tillegg, i vitro differensiering av disse cellene til odontoblaster, ble vurdert av kvantitativ Alizarin Red S analysen & QPCR.
Eksisterende protokoller for å isolere pulpavevet fra menneskelig tann hadde blitt brukt ulike instrumenter som tang (bein tang) 9, utryddelsen …
The authors have nothing to disclose.
Vi takknemlig erkjenne Dr. Leila Shakeri & Dr. Aref Dournaei for sin kritiske diskos og Mr. Mohammad Reza Khadem Sharif for hans tekniske støtte.
Name of the reagent | Company | Catalogue or Lot. number | Comments (optional) |
α-MEM | GIBCO | 11900-073 | |
Collagenase type I | Sigma-Aldrich | C0130-100MG | |
Dispase | GIBCO | 17105-041 | |
Penicillin/streptomycin | GIBCO | 15140-122 | |
Amphotericin B | GIBCO | 15290-018 | |
Fetal Bovine serum defined (FBS) | HyClone | SH30070.03 | |
L-ascorbic acid 2-phosphate | Sigma | A8960-5G | |
L-glutamine | GIBCO | 25030-024 | |
Dexamethasone | Sigma | D4902 | |
β-Glycerol phosphate disodium salt hydrate, BioUltra | Sigma | G9422-100G | |
Potassium phosphate monobasic | Sigma-Aldrich | P5655 | |
Osteogenesis Assay Kit | Millipore | PS01802031 | |
Mouse IgG2b-PE isotype control | BD pharmingen | 50808088029 | |
FITC mouse IgG2b isotype control | BD pharmingen | 559532 | |
FITC mouse IgG1 κ isotype | BD pharmingen | 11471471 | |
FITC/PE mouse anti-human CD34/CD45 | BD pharmingen | 341071 | |
PE anti-human CD146 | BD pharmingen | 550315 | |
Monoclonal mouse anti-human CD90/FITC | Daka | 00034418 | |
PE mouse anti-human CD73 | BD pharmingen | 550257 | |
Anti-h CD105/Endoglin PE | BD pharmingen | FAB10971P | |
PE mouse anti-human CD11b/Mac1 | BD pharmingen | 5553888 | |
CD44 PE mouse anti human | BD pharmingen | 555479 | |
Phosphate buffer Solution (PBS) | GIBCO | 003000 | |
70-μm cell strainer | Falcon | 352360 | |
0.2 μm syringe filter | Millex-GV | SLGV033RB | |
25 cm2 culture flask | Sigma-Aldrich | Z707481 | |
EQUIPMENT | |||
BD FACSCalibur | BD | 342975 | |
multiskan microplate spectrophotometer | Thermo scientific | 51119200 | |
Fleurcense Microscope | Olympus | ||
Flowing Software version 2.3.1 |