Vi beskriver en værdifuld diagnostisk test, der potentielt kan bruges til at afgøre tilbagetrækning af immunosuppression efter transplantation uden forhøjet risiko for afstødning. Analysen anvender principperne for forsinket type Overfølsomhed og giver præcis vurdering af såvel donor specifikke effektor og lovgivningsmæssige immunreaktioner monteres ved modtagerne.
Forsinket hypersensitivitet reaktion (DTH) er en hurtig in vivo manifestation af T-celle-afhængig immunrespons mod et fremmed antigen (Ag), at værtens immunsystem har oplevet i den seneste tid. DTH reaktioner er ofte opdelt i en sensibilisering fase, med henvisning til den oprindelige antigen oplevelse og en udfordring fase, som normalt følger flere dage efter sensibilisering. Manglen på en forsinket hypersensitivitet reaktion på en tilbagekaldelse Ag demonstreret ved hudtest er ofte betragtes som et bevis på anergy. Den traditionelle DTH assay er blevet anvendt effektivt til at diagnosticere mange mikrobielle infektioner.
Trods deling lignende immune funktioner såsom lymfocytinfiltrering, ødem og vævsnekrose, er den direkte DTH ikke et muligt diagnostisk teknik i transplanterede patienter på grund af muligheden for direkte indsprøjtning resulterer i sensibilisering til donor-antigener og graft tab. For at undgå dette problem, brummenen-til-mus "trans-vivo"-DTH-assay blev udviklet 1,2. Denne test er primært en overførsel DTH assay, hvor humane perifere mononukleære blodceller (PBMC'er) og specifikke antigener blev injiceret subkutant i pinnae eller trædepuden af en naiv mus og DTH-lignende hævelse måles efter 18-24 timer 3.. Det antigen præsentation af menneskelige antigenpræsenterende celler, såsom makrofager eller DCS-til T-celler i meget vaskulær musevæv udløser inflammatoriske kaskade og tiltrækker mus immunceller resulterer i hævelse svar. Svaret er antigen-specifikke og kræver forudgående antigen sensibilisering. En positiv donor-reaktivt DTH respons i Tv-DTH assay afspejler, at transplantation patienten har udviklet en pro-inflammatoriske immune disposition mod graft alloantigener.
Det vigtigste træk ved dette assay er, at det også kan anvendes til at detektere regulatoriske T-celler, der forårsager bystander-suppression. Bystander-suppression af etDTH recall reaktion i overværelse af donor-antigen er karakteristisk for transplanterede patienter med accepterede allotransplantater 2,4-14. Overvågningen af transplanterede patienter til alloreactivity og regulering af TV-DTH kan identificere en undergruppe af patienter, der kunne drage fordel af reduktionen af immunosuppression uden forhøjet risiko for afvisning eller forringet nyrefunktion.
Et lovende område er anvendelsen af Tv-DTH assay i overvågningen af autoimmunitet 15,16 og også i tumorimmunologi 17..
Trans-vivo DTH-analysen er en ny diagnostisk test med en potentiel klinisk anvendelse ved vurderingen celle-medierede responser i transplantation, cancer og autoimmune patienter. Det er værdifuld, fordi det er ikke kun nyttige i overvågningen recall T effektor responser, men også det kan detektere T regulatoriske responser. En pålidelig måde at opdage menneskets DTH regulering kunne forudsige sikkerheden af immunosuppression tilbagetrækning hos patienter, der er kandidater til monoterapi eller tolerance fors…
The authors have nothing to disclose.
Forfatterne vil gerne anerkende bidragene fra AM VanBuskirk til udviklingen af vores forståelse af det regulerede DTH respons hos transplanterede patienter. Dette arbejde blev støttet NIH tilskud PO1AI084853 og R01AI066219-06, og af EU-sponsorerede One Study.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
ACD tube for blood collection | BD | 02-684-26 | |
Lymphocyte Separation Medium | Cellgro | 25-072-CV | |
Dulbecco’s Phosphate-Buffered Saline | Cellgro | 21-031-CM | Without calcium & magnesium |
ACK Lysis Buffer | BioWhittaker | 10-548E | |
TT/DT or EBV | Sanofi Pasteur Inc./ Meridian Life Science, Inc. | TT/DT 25 μg/injection EBV 8 μg/injection | |
Protease inhibitor PMSF | Sigma-Aldrich | 78830 | |
Eosine for cell count | Sigma-Aldrich | E-6003 | |
Alloantigen | Purified HLA antigens, synthetic allopeptides can be used instead of donor cell-free lysates | ||
50 ml sterile centrifuge tubes | Fisher Scientific | 06-443-18 | |
10 ml pipettes and pipettor | BD Falcon | 13-675-20 | |
2 ml safe-lock tubes | Costar | 3213 | |
1000 μl, 100 μl , 10 μl pipettes with sterile tips | |||
Hemocytometer | Fisher | 02-671-10 | |
Full size centrifuge and microfuge | Beckman Coulter/Eppendorf | ||
1/2cc or 1cc insulin syringes | Becton Dickinson | 14-826-79 | 28 gauge |
Vibracell sonicator | Divtech Equipment Co. Sonocs& Materials Inc | 2 mm probe | |
Dial thickness gauge | Mitutoyo, Japan | ||
SCID mice | Harlan | ||
Isoflurane | Piramal Healthcare | Inhalant anesthesia |