يوصف أسلوب لمعالجة المواد تجاهل الإنسان الثديية الجراحية. ويمكن تخزين الأنسجة المصنعة، في شكل organoids، مجمدة إلى أجل غير مسمى أو وضعها في الثقافة لنمو طويل الأجل. هذه الطريقة تمكن من فحص تجريبي الإنسان العادي بيولوجيا الخلايا الظهارية، وآثار الاضطرابات الخارجية.
دراسة تجريبية لالثديية الإنسان العادي الظهارية السلوك (HMEC) خلية، وكيف يكتسب خصائص الخلايا الطبيعية غير طبيعية، يمكن أن تيسره في نظم الثقافة المختبر بدقة أكبر نموذج في علم الأحياء الجسم الحي. استخدام الإنسان لدراسة مواد مشتقة التمايز الخلوي، والشيخوخة، الشيخوخة، وتخليد أمر مفيد نظرا لكثرة الخلافات الجزيئية كبيرة في هذه الخصائص بين الخلايا البشرية واستخدامها القوارض عادة 1-2. الخلايا الثديية تقديم نموذج مناسب لنظام كميات كبيرة من الأنسجة الطبيعية وغير الطبيعية متوفرة بسبب وتيرة الحد من رأب الثدي وجراحات استئصال الثدي.
الغدة الثديية يتكون من خليط معقد من العديد من أنواع الخلايا متميزة،، الظهارية على سبيل المثال، الدهنية، الوسيطة، البطانية. الخلايا الظهارية هي المسؤولة عن وظيفة الثديية متباينة من الرضاعة،وأيضا أصل الغالبية العظمى من سرطانات الثدي البشرية. وقد وضعنا طرق لمعالجة الغدة الثديية الأنسجة تجاهل الجراحية إلى مكونات نقية الظهارية وكذلك خلايا اللحمة المتوسطة 3. ويمكن تخزين المواد المصنعة المجمدة إلى أجل غير مسمى، أو شرع في الثقافة الأولية. ويتم نقل المواد الجراحية تجاهل إلى المختبر وتشريح يدويا لإثراء الأنسجة التي تحتوي على لالظهارية. الهضم لاحقة من الأنسجة تشريح باستخدام شرائط هيالورونيداز كولاجيناز والمواد اللحمية من ظهائر في الغشاء القاعدي. ويمكن فصل القطع الصغيرة الناتجة من شجرة الظهارية (organoids) من سدى هضمها عن طريق الترشيح متتابعة على الأغشية من حجم المسام الثابتة. اعتمادا على حجم المسام، يمكن الحصول على الكسور التي تتكون من قطعة أكبر الأقنية / السنخية، مجموعات أصغر السنخية، أو الخلايا اللحمية. وقد لاحظنا نمو متفوقة عندما بدأت الثقافات وorganoids بدلا من ديسواحد الخلايا sociated. وضع organoids في استخدام وسائل الإعلام ثقافة حمل منخفضة الإجهاد تدعم النمو على المدى الطويل من HMEC طبيعية مع علامات من أنواع متعددة النسب (، اللمعية ظهاري عضلي، السلف) 4-5. ويمكن الحصول على عدد كاف من خلايا الأنسجة من فرد واحد للسماح باستخدام الفحص التجريبي واسعة دفعات خلية موحدة، وكذلك التحقيق باستخدام أساليب إنتاجية عالية.
وقد استخدمت HMEC مثقف في مجموعة متنوعة واسعة من الدراسات الوبائية التي تبحث في العمليات العادية التي تحكم النمو، والتمايز، والشيخوخة، والشيخوخة، وكيف يتم تغيير هذه العمليات العادية خلال التحول الخالد والخبيثة 4-15،16. ويمكن مقارنة آثار النمو في وجود مواد المصفوفة خارج الخلية، أنواع الخلايا الأخرى، و / أو الثقافة 3D مع النمو على 5،15 البلاستيك. HMEC مثقف، بدءا الخلايا الطبيعية، وتوفير نظام لين العريكة تجريبيا لدراسة العوامل التيقد دفع أو منع الشيخوخة الإنسان والتسرطن.
الإنسان معالجة الأنسجة الثديية الطريقة المعروضة هنا يمكن الحصول على الخلايا الظهارية الثديية نقية من خليط غير متجانس من أنواع الخلايا في الثدي الإنسان. الترشيح من خلال مسام حجم ثابت يسمح الفصل بين الفصائل المختلفة في الغدة الثديية (مثل الأقنية والسنخية، مقابل الأقنية السنخية) من المصفوفة اللحمية هضمها. ويمكن الحصول على الخلايا الليفية الثديية إسوية الجينات لتتناسب مع الخلايا الظهارية. احتفظ المجمدة المواد هضمها جدوى جيدة لأكثر من 30 عاما. وقد عملت هذه الطريقة بنجاح على كافة أنسجة الثدي الليفي ولكن جدا، وبسيطة لتنفيذ. الأشكال الأخرى من معالجة الأنسجة الثديية موجودة والتي لا توفر الكسور الظهارية التي هي قابلة للحياة، نظيفة، أو المنفصلين عن ذويهم. وضع organoids معالجتها في الثقافة مع وسائل الاعلام الإجهاد الذي يحفز منخفضة مثل M87A يسمح النمو على المدى الطويل من علامات HMEC مع نسب متعددة. HMEC التي تم زرعها على البلاستيك ما زالت تحتفظ القدرة على أجناسالشركة المصرية للاتصالات مع الهياكل 3D طبيعية في الجسم الحي علاقات النسب مثل. هذه الثقافات HMEC هي مناسبة لتحقيق تجريبية واسعة النطاق، بما في ذلك الإنتاجية العالية، والسلوك العادي وHMEC العوامل التي قد تدفع أو تمنع الشيخوخة والتحول.
The authors have nothing to disclose.
القانون النموذجي للتحكيم، حرس السواحل، ويتم دعم MRS من قبل NIA (R00AG033176 وR01AG040081) ومختبر البحوث الموجهة والتنمية، وزارة الطاقة عقد # DE-AC02-05CH11231.
Glass Petri dish 15 cm | VWR | 89000-308 |
Scissors 6.5″ | VWR | 82027-594 |
Forceps 8″ | VWR | 82027-436 |
Scalpels disposable | Miltex | 4-411 |
Collagenase | SIGMA | C0130 |
Hyaluronidase | SIGMA | H3506 |
Insulin | SIGMA | I5500 |
DMSO | SIGMA | D8418 |
Pennicillin/Streptomycin | Life Technologies | 15140-122 |
Fungizone | Life Technologies | 15290-018 |
Polymixin B sulfate | Life Technologies | 21850-029 |
Fetal Bovine Serum | Life Technologies | 26140-087 |
Trypsin 0.05% 100 ml | Life Technologies | 25300-054 |
DMEM/F12 | Life Technologies | 11039-021 |
HulaMixer | Life Technologies | 159-20D |
Cell strainer 100 μm | BD Falcon | 352360 |
Cell strainer 40 μm | BD Falcon | 352340 |
Tubes 15 ml | Greiner bio-one | 188-261 |
Tubes 50 ml | Greiner bio-one | 227-261 |
TC dishes 10 cm | Greiner bio-one | 664-160 |
TC dishes 6 cm | Greiner bio-one | 628-160 |
Cryogenic vials | Nalgene | 5000-1020 |
Heamocytometer | Hauser Scientific | 1490 |
Centrifuge | Eppendorf model | 5702 |