Mesure de la durée de vie en<em> Drosophila melanogaster</em
Summary
Drosophila melanogaster est un organisme modèle puissant pour explorer la base moléculaire de la régulation longévité. Ce protocole discuter des étapes à suivre pour générer un reproductible, basée sur la population de mesure de la longévité ainsi que les pièges potentiels et comment les éviter.
Abstract
Le vieillissement est un phénomène qui se traduit par une détérioration physiologique stable dans pratiquement tous les organismes dans lesquels il a été examiné, conduisant à des performances physiques réduites et un risque accru de la maladie. Vieillissement individuel est manifeste au niveau de la population comme une augmentation de la mortalité liée à l'âge, ce qui est souvent mesurée en laboratoire en observant la durée de vie dans les grandes cohortes d'individus appariés selon l'âge. Les expériences qui cherchent à quantifier la mesure dans laquelle génétique ou l'impact environnemental des manipulations durée de vie dans des organismes modèles simples ont connu un succès remarquable pour comprendre les aspects du vieillissement qui sont conservés entre les taxons et d'inspirer de nouvelles stratégies pour étendre la durée de vie et la prévention des maladies liées à l'âge chez les mammifères .
La mouche du vinaigre, Drosophila melanogaster, est un organisme modèle intéressant pour l'étude des mécanismes de vieillissement en raison de sa relativement courte durée de vie, l'élevage pratique et la génétique faciles.Toutefois, les mesures démographiques du vieillissement, notamment l'âge de la survie spécifique et la mortalité, sont extrêmement sensibles aux variations, même mineures dans la conception expérimentale et de l'environnement, et le maintien de bonnes pratiques de laboratoire strictes pour la durée des expériences de vieillissement est nécessaire. Ces considérations, ainsi que de la nécessité de pratiquer un contrôle minutieux du contexte génétique, sont essentielles pour générer des mesures robustes. En effet, il existe de nombreuses controverses entourant notables inférence à partir des expériences de longévité chez la levure, les vers, les mouches et des souris qui ont été tracées à des artefacts environnementaux ou génétiques 1-4. Dans ce protocole, nous décrivons un ensemble de procédures qui ont été optimisés pendant de nombreuses années de mesure de la longévité chez la drosophile en utilisant des flacons de laboratoire. Nous décrivons également l'utilisation du logiciel dLife, qui a été développé par notre laboratoire et est disponible en téléchargement ( http://sitemaker.umich.edu/pletcherlab / logiciel). dLife accélère le débit et la promotion de bonnes pratiques en intégrant la conception expérimentale optimale, ce qui simplifie la manipulation mouche et la collecte de données, et en normalisant l'analyse des données. Nous discuterons également les nombreux pièges potentiels dans la conception, la collecte et l'interprétation des données de durée de vie, et nous fournissons des mesures pour éviter ces dangers.
Protocol
Representative Results
Discussion
Le protocole présenté ici décrit une méthode pour produire des mesures reproductibles de la longévité des adultes chez la drosophile qui est adaptable pour l'évaluation des ressources génétiques, des interventions pharmacologiques et environnementaux. Aspects cruciaux du protocole comprennent un contrôle minutieux de l'environnement de développement larvaire, la réduction du stress des adultes, et minimiser les biais entre les groupes expérimentaux et de contrôle. Nous présentons égaleme…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par un financement de la Fondation Ellison Medical (SDP, http://www.ellisonfoundation.org/index.jsp ), NIH K01AG031917 (NJL, http://www.nih.gov/ ), NIH 5T32GM007315-35 (JR) et le NIH R01AG030593 (SDP). Ce travail a utilisé les ressources de la base Drosophila vieillissement (CAD) de l'amortisseur Nathan Centre d'excellence en biologie du vieillissement financée par le National Institute of Aging P30-AG-013283 ( http://www.nih.gov/ ). Les auteurs tiennent à remercier le Laboratoire Pletcher pour des discussions utiles et notamment Brian Chung pour la lecture critique du manuscrit. Nous tenons à remercier Nick Asher et Kathryn Borowicz de l'aide pour la collecte de données.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| Active Dry Yeast | Fleishmann’s Yeast | 2192 | |
| Grape Agar Powder Premix | Genesee Scientific | 47-102 | |
| Large Embryo Collection Cages | Genesee Scientific | 59-101 | |
| Large Replacement End Caps | Genesee Scientific | 59-103 | |
| 6 oz Square Bottom Bottles, polypropylene | Genesee Scientific | 32-130 | |
| Flugs Closures for Stock Bottles | Genesee Scientific | 49-100 | |
| Drosophila Vials, Wide, Polystrene | Genesee Scientific | 32-117 | |
| Flugs Closures for Wide Vials | Genesee Scientific | 49-101 | |
| Wide Orifice Aardvark Pipet Tips, 200 ul | Denville Scientific | P1105-CP | |
| Flystuff Flypad, Standard Size | Genesee Scientific | 59-114 | |
| BD Falcon 15 ml Conical Centrifuge Tubes | Fisher Scientific | 14-959-70C | |
| Fisherbrand Petri Dishes with Clear Lids, Raised Ridge; 100 O.D. x 15 mm H; | Fisher Scientific | 08-757-12 | |
| Kimax* Colorware Flasks 1,000 ml yellow | Fisher Scientific | 10-200-47 | |
| PBS pH 7.4 10x | Invitrogen | 70011044 | |
| Gelidium Agar | Mooragar | n/a | |
| Brewer’s Yeast | MP Biomedicals | 0290331280 | |
| Granulated Sugar | Kroger | n/a | |
| Tegosept | Genesee Scientific | 20-266 | Fly Food Preservative |
| Propionic Acid, 99% | Acros Organics | 149300025 | Fly Food Preservative |
| Kanamycin Sulfate | ISC BioExpress | 0408-10G | |
| Tetracycline HCl | VWR | 80058-724 |
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