השתלה של תאים סרטניים לתוך האיבר ממוצא יכולה לשמש מודל פרה שימושי כדי להעריך את הטיפולים חדשניים. ניתן לגדל תאי קרצינומה של שלפוחית השתן MB49 בתוך שלפוחית השתן בעקבות החדרת שלפוחית. פרוטוקול זה מדגים צנתור של שלפוחית השתן בעכבר לצורך השתלת גידול ואספקת adenoviral.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
סרטן שלפוחית השתן לדגם orthotopic ג'ין משלוח לימודים
במאמר זה
סיכום
תקציר
סרטן שלפוחית השתן הוא הסרטן השני בשכיחותו בדרכי השתן ואברי המין וגישות טיפוליות חדשניות שיכול להפחית את ההישנות והתקדמות נדרשות. Microenvironment הגידול יכול להשפיע באופן משמעותי את התפתחות גידול ותגובה לטיפול. לכן לעתים קרובות רצוי לגדל תאים סרטניים באיבר שממנו הם מקורו. פרוטוקול זה מתאר מודל orthotopic של סרטן שלפוחית השתן, שבו תאי סרטן שלפוחית השתן עכבריים MB49 הם החדירו לתוך שלפוחית השתן באמצעות צנתור. השתלת תאים סרטניים מוצלחת במודל זה דורשת שיבוש של שכבת glycosaminoglycan מגן, שיכול להתבצע על ידי אמצעים פיזיים או כימיים. בפרוטוקול שלנו מטפל בשלפוחית השתן עם טריפסין לפני החדרת תא. גם צנתור של שלפוחית השתן יכול לשמש כדי לספק תרופות פעם הגידולים מבוססים. פרוטוקול זה מתאר את המסירה של מבנה adenoviral שמבטא את גן כתב לוציפראז. בעוד oפרוטוקול ur כבר מותאם למחקרים לטווח קצר ומתמקד במסירת הגן, יש לו את המתודולוגיה של צנתור שלפוחית השתן עכבר יישומים רחבים.
מבוא
סרטן שלפוחית השתן הוא הסרטן השני בשכיחותו בדרכי השתן ואברי מין עם כמעט 75,000 מקרים חדשים ו -15,000 מקרי מוות צפוי ב2012 1. שיעור גבוה של הישנות דורש מעקב לאורך כל חייהם, מה שהופך את סרטן שלפוחית השתן אחד מסוגי הסרטן היקרים ביותר לטיפול. סרטן שלפוחית השתן שפלש לשכבת השריר עלול לשלוח גרורות לכבד, ריאות או עצם באמצעות מערכת הלימפה. טיפול multimodal של תוצאות גידולים מתקדמים בהישרדות רק 20-40% אחרי 5 שנים. לכן, אסטרטגיות טיפול יעילות שנועדו להקטין את ההישנות והתקדמות של הסרטן השטחי של שלפוחית השתן, כמו גם לשפר את התוצאות טיפוליות בחולים עם מחלה מתקדמת יש צורך דחוף.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל ההליכים כרוכים בבעלי חיים כבר נבדקו ואושרו על ידי הוועדה המוסדית טיפול בבעלי חיים ושימוש באוניברסיטה הרפואית של דרום קרוליינה. הפרוטוקול אושר תחת הקטגוריה D-USDA לכאב.
1. השתלת תאים
- יומיים לפני ביצוע ההליך, צלחת 1 x 10 6 MB49 תאים לתוך T-25 צלוחיות. השתמש DMEM גלוקוז הגבוה בתוספת 10% FBS (ואנטיביוטיקה, אם רוצה). בקבוק אחד מספיק לכל קבוצה של עד חמישה עכברים שיהיו מורדמת ומושתלות במקביל.
- ביום של ההליך, להכין ט....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
המטוריה הוא ציין כמעט בכל עכברים תוך 8 ימים לאחר ההשתלה של 200,000 MB49 תאים. כפי שניתן לראות באיור 1, משקל שלפוחית השתן יותר מאשר מכפיל מ34.7 ± מ"ג 3.3 (טווח 31-37 מ"ג, n = 4) בnontumor (טווח 77-120 מ"ג, n = 10) נושאות עכברים ל87.5 ± 19.2 מ"ג בעכברים ש כבר מושתל עם MB49 תאים. במונחים של משלוח הגן, מצאנו כי הדמיה עכברים 24 שעות לאחר החדרה נגיפית תשואות אות חזקה יותר לאחר 48 שעה (איור 2). משלוח adenoviral הוא משתנה מאוד בין בע.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
המתודולוגיה העיקרית שתוארה בפרוטוקול זה היא צנתור של שלפוחיות עכבר, שבה יש יישומים רחבים להחדרה של תאים, או כל סוכן שנועד למשלוח מקומי לאפיתל שלפוחית השתן. הפרוטוקול הספציפי שתואר לעיל כבר מותאם למחקרים לטווח קצר (~ 10 ימים). להשתיל את המספר מדויק של תאים הוא קריטי, שכן מספר תא גבוה יותר יגרום ליותר צמיחה מהירה של גידול ואולי אובדן של בעלי חיים עקב נטל גידול גדול. באמצעות 200,000 MB49 תאים להחדרה עשויה לדרוש הרדמת חסד עד 25% מבעלי החיים על ידי היום 14 בשל נטל גידול מוגזם. מניסיו.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי NIH R21 CA143505 לכריסטינה Voelkel-ג'ונסון.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| שם המגיב | החברה | מספר קטלוגי | הערות |
| 6-8 שבועות עכברים נקבות | מעבדות ג'קסון | שם זן: C57BL/6J מספר מלאי: 000664 | |
| Trypsin* | MediaTech | MT25-053-CI | הושג באמצעות פישר |
| DMEM* | MediaTech | MT10-017-CV | הושג באמצעות פישר |
| FBS | Hyclone | SH30071.03 | מופעל בחום |
| צלוחיות T25* | קורנינג קוסטאר | מס' קורנינג: 3056 פישר: 07-200-63 | מתקבל באמצעות תאים של פישר |
| MB49 תאים | N/A | N/A | התקבל מד"ר בוהל (ראה הפניה11) |
| משחה וטרינרית Puralube* | Pharmaderm | Henry Schein Company No.:036090-6050059 Fisher: NC9676869 | מושג באמצעות Fisher |
| קרם אפילציה: Veet | בית מרקחת מקומי | ||
| חומר סיכה: K-Y ג'לי | בית מרקחת מקומי | ||
| קטטרים* | Exel International | Exel International No.:26751; < / p> Fisher: 14-841-21< / p> | מתקבל באמצעות Fisher< / p> |
| Isoflurane< / p> | Terrell | NDC 66794-011-25< / p> | הושג באמצעות בית מרקחת של בית חולים< / p> |
| 1 מ"ל מזרקי שחפת עם קצה החלקה< / p> | Becton Dickinson | BD309659< / p> Fisher: 14-823-434< / p> | |
| D-Luciferin | Gold Biotechnologies | L-123-1 | |
| Ad-CMV-Luc | VectorBiolabs | 1000; בקש הגברה בקנה מידה גדול וטיהור CsCl עבור שימוש בin vivo | חומר זיהומי הדורש הכלת BSL2 |
| Steady-Glo מערכת בדיקת לוציפראז | Promega | E2510 (10 מ"ל), E2520 (100 מ"ל), או E2550 (10 x 100 מ"ל) | |
*זמין דרך מספר ספקים | |||
EQUIPMENT | |||
| מערכת הרדמה | מערכות E-Z, Euthanex Corporation | מערכת הרדמה: EZ7000 מכשיר הנשמה של עכבר עם 5 יציאות: EZ109 | מתקבל באמצעות Fisher |
| Xenogen IVIS 200 | Caliper Life Sciences | http://www.caliperls.com/products/preclinical-imaging/ivis-imaging-system-200-series.htm | |
| FLUOstar Optima | BMG Labtech | http://www.bmglabtech.com/products/microplate-reader/instruments.cfm?product_id=2 |
מקורות
- Siegel, R., Naishadham, D., Jemal, A. Cancer statistics, 2012. CA Cancer. J. Clin. 62 (1), 10-29 (2012).
- Seager, C. M., Puzio-Kuter, A. M., et al. Intravesical delivery of rapamycin suppresses tumorigenesis in a mouse model of progressive bladder cancer. Canc....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
