Um método de duas fases para estabelecer a doença renal crónica (IRC) em ratos Lewis por remoção cirúrgica da massa renal 5/6th é descrito. Combinação do procedimento cirúrgico, NOS-inibição e uma dieta rica em sal leva a um modelo semelhante CKD humano, permitindo estudo dos mecanismos causais e desenvolvimento de intervenções terapêuticas.
A doença renal crônica (DRC) é um problema global. Retardar a progressão da doença renal crônica é uma das principais prioridades de saúde. Desde DRC é caracterizada por desarranjos complexos de homeostase, os modelos animais integrativos são necessárias para estudar o desenvolvimento e progressão de DRC. Para estudar o desenvolvimento de intervenções terapêuticas com DRC e romance em CKD, usamos o modelo de ablação nefrectomia 5/6th, um modelo experimental bem conhecido de doença renal progressiva, assemelhando-se vários aspectos da CKD humano. A redução bruta da massa renal provoca glomerular progressiva e lesão túbulo-intersticial, perda de néfrons remanescentes e desenvolvimento de hipertensão arterial sistêmica e glomerular. Também está associada com a perda progressiva intra capilar, inflamação e glomeruloesclerose. Fatores de risco para DRC invariavelmente impacto sobre a função endotelial. Para simular isso, nós combinamos remoção de 5/6th da massa renal com o óxido nítrico (NO) exaustão e uma dieta rica em sal. Após a chegada e aclimatação, os animais receber um inibidor da sintase de NO (NG-nitro-L-arginina) (L-NNA), suplementado com a água de beber (20 mg / L) durante um período de 4 semanas, seguido de uninefrectomia no lado direito. Uma semana mais tarde, uma nefrectomia subtotal (SNX) é realizada no lado esquerdo. Após SNX, os animais são deixados a recuperar durante dois dias seguidos por LNNA na água de beber (20 mg / L) por um período adicional de 4 semanas. Uma dieta rica em sal (6%), complementado em terra de comida (veja linha do tempo Figura 1), continua durante todo o experimento. A progressão da insuficiência renal é seguida ao longo do tempo medindo a ureia plasmática, pressão arterial sistólica e proteinúria. Por seis semanas após SNX, insuficiência renal desenvolveu. A função renal é medida usando inulina "padrão ouro" e ácido para-amino hipúrico (PAH), tecnologia de apuramento. Este modelo de DRC é caracterizada por uma redução na taxa de filtração glomerular (TFG) e do fluxo plasmático renal eficaz (FPER), hipertensão (pressão sanguínea sistólica> 150 mm Hg), a proteinúria (> 50 mg/24 hr) E uremia leve (> 10 mM). As características histológicas incluem danos túbulo-intersticial reflectida pela inflamação, atrofia tubular, e fibrose e glomeruloesclerose focal conduzindo a enorme redução dos glomérulos saudáveis na população remanescente (<10%). Follow-up até 12 semanas após SNX mostra a progressão da DRC.
Devido ao seu caráter progressivo, resultante final da doença renal em estágio, e morbidade cardiovascular e mortalidade associadas, DRC é um problema crescente de saúde pública 1. Retardar a progressão da doença renal crônica é, portanto, uma prioridade de saúde. Desde DRC é caracterizada por desarranjos complexos de homeostase, os modelos animais integrativos são necessárias para estudar o desenvolvimento e progressão de DRC. O rim é composto de uma ampla gama de diferentes tipos de células que interagem uns com os outros. Esta complexidade não pode ser mimetizado in vitro.
Para estudar as intervenções terapêuticas em CKD, usamos o modelo 5/6th nefrectomia ablação, um modelo experimental bem conhecido de doença renal progressiva, assemelhando-se vários aspectos da CKD humano 2,3. A redução bruta da massa renal provoca glomerular progressiva e lesão túbulo-intersticial, perda de néfrons remanescentes e desenvolvimento de hipertensão arterial sistêmica e glomerular. Ela está associada com progrperda essive intrarenal capilar 4, inflamação e glomeruloesclerose. Fatores de risco para DRC invariavelmente impacto sobre a função endotelial 5. Usamos uma estirpe de rato (Lewis) que é relativamente resistente ao desenvolvimento de DRC e, portanto, a remoção combinada de 5/6th da massa renal com óxido nítrico (NO) depleção 6, 7, 8 e uma dieta rica em sal 9. Após a chegada e de aclimatação, os animais recebem um inibidor da NO-sintase (L-NNA), suplementado com a água de beber (20 mg / L) durante um período de 4 semanas, seguido de uninefrectomia lado direito (UNX), com continuação da L-NNA após dois dias . Uma semana depois, a nefrectomia subtotal (SNX), ou seja remoção de 2/3rds de massa renal é realizado no lado esquerdo. Após SNX, os animais são deixados a recuperar durante 2 dias, seguido novamente por 20 mg / L na água de beber LNNA por um período de 4 semanas. Uma dieta rica em sal (6%), complementado em terra de comida (veja linha do tempo Figura 1), continua durante todo o experimento. Tele razão para realizar o UNX no lado direito e a SNX no lado esquerdo é que os vasos renais são mais longos no lado esquerdo, que torna mais fácil o acesso ao rim sem esticar os vasos muito quando o rim é exposto fora do corpo . Na literatura, os modelos são descritos em que os pólos do rim esquerdo são removidos em primeiro lugar, seguido por UNX do rim direito, uma semana depois 10,11,12. Nas nossas mãos este modelo mostrou um desenvolvimento muito mais rápido de insuficiência renal, mas também uma variação muito maior na perda da função renal. A progressão da insuficiência renal é seguida ao longo do tempo medindo a ureia plasmática, pressão arterial sistólica e proteinúria. Por seis semanas após SNX, insuficiência renal desenvolveu, caracterizada pela diminuição acentuada na taxa de filtração glomerular (69%) e do fluxo plasmático renal eficaz (62%) 13 de hipertensão (pressão sanguínea sistólica> 150 mm Hg), a proteinúria (> 50 mg/24 hr) e leve uremia (> 10 mM). Características histológicas incluem Tubuldanos o-reflectida pela inflamação intersticial, atrofia tubular e fibrose e glomeruloesclerose focal conduzindo a enorme redução dos glomérulos saudáveis na população remanescente (<10%). Follow-up até 12 semanas após SNX mostra a progressão da DRC, proporcionando uma janela de oportunidade para a avaliação de intervenções terapêuticas.
A remoção cirúrgica do 5/6th da massa renal em ratos Lewis, combinada com uma dieta rica em sal e inibição temporária NOS leva a um modelo de doença renal crônica que se assemelha CKD humana e permite o estudo dos mecanismos causais e eficácia de intervenções terapêuticas em CKD.
O modelo de nefrectomia 5/6th é um modelo bem conhecido e descrito extensivamente para DRC. No entanto, a simples remoção 5/6th da massa renal não levar à insuficiência renal imediato em todas as c…
The authors have nothing to disclose.
Agradecemos Krista den Ouden pelo seu excelente assistência técnica. Esta técnica foi apoiado financeiramente pela Fundação do Rim holandês, concessão C06.2174. MCV é apoiada pela organização Holandesa para Pesquisa Científica (NWO) Vidi-concessão 016.096.359.
Reagent | |||
L-NNA | Sigma-aldrich | N5501 | |
Spongostan dental: gel foam pads 1x1x1 cm | Johnson&Johnson | Ms0005 | |
Ethicon Vicryl FS-2S naald 4/0 V392H p/36 | Ethicon | V303H | |
Ethicon Vicryl RB-1+ naald 5/0 V303H p/36 | Ethicon | V392H | |
Buprenorphine (0.3 mg/ml) | Via local pharmacist ordered by Reckitt Benckiser pharmaceuticals | unknown | |
Equipment | |||
Student Tissue Forceps – 1×2 Teeth 12 cm | Fine Science Tools (FST) | 91121-12 | |
Student Standard Pattern Forceps | FST | 91100-12 | |
Mayo Scissors | FST | 14010-15 | |
2X Semken Forceps | FST | 11008-13 | |
Student Iris Scissors | FST | 91460-11 | |
Olsen-Hegar Needle Holder | FST | 12002-14 |