चूहे में सहज metastatic वृक्क कोशिका कार्सिनोमा (mRCC) मॉडलिंग के बाद nephrectomy
Summary
सहज metastatic वृक्क कोशिका कार्सिनोमा (आरसीसी) रोग प्रगति के मॉडल एक नैदानिक प्रासंगिक सेटिंग में उपचार के मूल्यांकन के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. इस प्रोटोकॉल orthotopic गुर्दे ट्यूमर सेल आरोपण, उचित nephrectomy के लिए विभिन्न प्रक्रियाओं को दर्शाता है, और अंत में metastatic बोझ और स्थानीयकरण का दृश्य और bioluminescent स्कोरिंग के लिए एक शव – परीक्षा गाइड की रूपरेखा.
Abstract
गुर्दे सेल कार्सिनोमा (आरसीसी) में नई प्रायोगिक चिकित्सा के सुधार का परीक्षण करने के लिए प्रमुख चुनौतियों में से एक को ईमानदारी से जल्दी और देर चरण metastatic रोग प्रगति पुनरावृत्ति कि मॉडल का विकास है. विशिष्ट ट्यूमर आरोपण मॉडल अस्थानिक या orthotopic प्राथमिक ट्यूमर आरोपण का उपयोग, लेकिन कुछ नैदानिक सेटिंग mimics कि प्रणालीगत सहज metastatic रोग शामिल हैं. इस प्रोटोकॉल आरसीसी रोग प्रगति रोगियों के समान चरणों में विकसित करने के लिए महत्वपूर्ण कदम का वर्णन करता है. सबसे पहले, यह orthotopic ट्यूमर सेल आरोपण दिखाने के लिए एक syngeneic मॉडल में एक अत्यधिक metastatic माउस ट्यूमर सेल लाइन का उपयोग करता है. तरीके रिसाव और जल्दी प्रसार को रोकने के Matrigel के साथ संयुक्त कोशिकाओं के साथ उप सम्पुटी अंतरिक्ष में सतही और आंतरिक आरोपण शामिल हैं. अगला यह महत्वपूर्ण पूर्व और शल्य चिकित्सा के बाद माउस देखभाल के साथ, ट्यूमर असर गुर्दे (nephrectomy) के छांटना के लिए प्रक्रियाओं का वर्णन है. अंत में, यह निगरानी और मूल्यांकन करने के लिए आवश्यक कदम की रूपरेखासूक्ष्म और साथ ही bioluminescent इमेजिंग सहित स्थूल metastatic रोग प्रगति, प्रणालीगत रोग वितरण स्कोर करने के लिए एक विस्तृत दृश्य पोस्टमार्टम मार्गदर्शन प्रदान करता है. इस प्रोटोकॉल विवरण के लक्ष्य के भविष्य चिकित्सीय परीक्षण के भविष्य कहनेवाला मूल्य में सुधार करने के लिए नैदानिक प्रासंगिक metastatic आरसीसी मॉडल के व्यापक उपयोग की सुविधा है.
Introduction
गुर्दे सेल कार्सिनोमा (आरसीसी) के साथ रोगियों में मृत्यु का प्रमुख कारण आम तौर पर गुर्दा में बढ़ रही है एक प्राथमिक ट्यूमर के सर्जिकल हटाने के बाद होता है कि प्रणालीगत metastatic रोग है. हालांकि, चूहों में प्रायोगिक चिकित्सा के मूल्यांकन बहुत कुछ preclinical ट्यूमर मॉडल metastatic रोग शामिल हैं, और कम अभी भी ईमानदारी से स्थानीयकृत विकास, सर्जरी, और सहज सूक्ष्म metastatic दीक्षा और प्रगति 1-3 नैदानिक चरणों पुनरावृत्ति. परीक्षण में इस अंतर के रूप में कभी कभी पशु मॉडल में देखा हड़ताली विरोधी ट्यूमर प्रभाव हमेशा मरीजों 4 की इसी सफल उपचार में अनुवाद नहीं किया नए उपचारों के मूल्यांकन में तेजी से महत्वपूर्ण बन गया है. परिणाम में इस तरह के मतभेदों स्थानीयकृत अस्थानिक या orthotopic प्राथमिक ट्यूमर मॉडल और देर चरण metastatic रोग 5-7 के बीच अंतर दवा efficacies से स्टेम सकता है. आरसीसी के मामले में, केवल कुछ अध्ययनों से स्थापित कार्यरत है एकआमतौर पर ट्यूमर असर गुर्दे पड़ा है जो mimics रोगियों पूर्ण या आंशिक रूप 2,3 हटा दिया कि सहज आवर्तक रोग भी शामिल है कि निमल प्रोटोकॉल. माउस मॉडल के परीक्षण में इस कमी के लिए कारणों से भिन्न हो. सबसे पहले, उच्च पशु लागत और ट्यूमर सेल चयन और metastatic क्षमता के निहित परिवर्तनशीलता है. (जैसे एक मानव कोशिका लाइन व्युत्पत्ति 8-10 का विवरण देखें) उदाहरण के लिए, मानव गुर्दे सेल लाइनों शायद ही कभी metastasize करते हैं, और orthotopic प्राथमिक आरोपण और लगातार प्रसार और दूर के घावों कि फार्म वेरिएंट प्राप्त करने के लिए metastatic चयन के कई दौर खत्म चयनित होना चाहिए . इसके विपरीत, असुरक्षित मॉडल में माउस कोशिकाओं आक्रामक तरीके से व्यवहार करते हैं, और कम सेल नंबर तत्काल प्रणालीगत प्रसार 3 को कम करने के लिए Matrigel इंजेक्शन के साथ किया जाना चाहिए. दूसरा, तकनीकी उचित आरोपण, शल्य लकीर (nephrectomy), और ट्रैकिंग में कठिनाइयों (और बढ़ाता) सहज metastatiसी वृद्धि चुनौतीपूर्ण हो सकता है और (विवरण के लिए चर्चा देखें) इस तकनीक को रोजगार जब कई महत्वपूर्ण चर विचार की जरूरत है. इस प्रोटोकॉल का उद्देश्य orthotopic आरोपण, लकीर (nephrectomy), और सहज metastatic आरसीसी रोग की निगरानी के लिए आवश्यक कदम (और साथ ही संभावित नुकसान) का वर्णन करने के लिए और मानकीकृत (और अधिक व्यापक) के लिए एक दिशानिर्देश पेशकश करने के लिए वैज्ञानिक प्रयोगशालाओं के बीच में प्रयोग है कि प्रायोगिक चिकित्सा की प्रभावकारिता का आकलन करें.
Protocol
Representative Results
Discussion
इस प्रोटोकॉल का उद्देश्य आरोपण / लकीर तकनीकों का वर्णन करने के लिए एक syngeneic ट्यूमर माउस मॉडल का उपयोग नैदानिक प्रासंगिक सहज metastatic रोग का आकलन करने के लिए है. वर्तमान में, उपन्यास प्रायोगिक चिकित्सा के मू?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम इस प्रक्रिया के विकास में तकनीकी सहायता और विशेषज्ञता के लिए डॉ. रॉबर्ट एस Kerbel (टोरंटो विश्वविद्यालय, Sunnybrook अनुसंधान संस्थान, टोरंटो, कनाडा) की प्रयोगशाला के लिए आभारी हैं. हम भी डा. सैंड्रा क़ब्र और प्रयोगशाला के पशु संसाधन के Roswell पार्क कैंसर संस्थान विभाग को धन्यवाद देना चाहूंगा. यह काम (JMLE के लिए) Roswell पार्क एलायंस फाउंडेशन की ओर से एक पुरस्कार द्वारा समर्थित किया गया.
Materials
| DMEM-high glucose with Pyr. And L-Glutamine | Corning | 10-013-CV | |
| FBS | Invitrogen | 10437-028 | |
| 0.25% Trypsin EDTA | Corning | 25-053-CL | |
| 1x DPBS without Calcium & Magnesium | Corning | 21-031-CV | |
| Matrigel | BD Biosciences | 354234 | must be kept on ice |
| Artifical tears-lubricant opthalmic ointment | Akorn Animal Health | 17478-162-35 | |
| Pocket pro pet trimmer | Braintree scientific | CLP9931B | |
| Alcohol swab | VWR | 326895 | |
| Betadine solution swab | VWR | 67618-152-01 | |
| MICRO DISSECTING sissors straight,blunt – 25mm blades – 4.5" | Southpointe surgical | RS-5982 | |
| Iris Forceps, serrated, curved, 10cm long | Kent scientific | INS15915 | need two of these |
| 10µl Hamilton syringe | Hamilton | 7635-01 | |
| 30G, 45 degree, RN needle | Hamilton | 7803-07 | |
| Sterile cotton tipped appicator | VWR | 10805-144 | |
| High temperature cautery kit | Kent scientific | INS500392 | |
| 5-0 coated Vicryl, conventional cutting needle | Ethicon | J834 | |
| Reflex clip applier for 7mm clips | Kent scientific | INS500343 | |
| Reflex clips, 7mm, non-sterile | Kent scientific | INS500344 | |
| Removing forceps, 12cm lone | Kent scientific | INS500347 | |
| 0.9% Sodium Chloride | Baxter Healthcare | 2B1322 | |
| Buprenorphine 0.01mg/mL | |||
| 25G 5/8" needle | VWR | BD305122 | |
| 1mL syringe w/out needle | VWR | BD309659 | |
| D-Luciferin | Gold Bio technology | LUCK-1G |
References
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