Farelerde spontan metastatik renal hücreli karsinom (MRCC) modelleme ardından nefrektomi
Summary
Spontan metastatik renal hücre karsinomu (RCC), hastalığın ilerlemesine modelleri klinik olarak anlamlı bir ortamda tedavi değerlendirmek için de kullanılabilir. Bu protokol, kadavradan böbrek tümör hücre implantasyonu, uygun nefrektomi için farklı prosedürler gösterir ve nihayet metastatik yükü ve lokalizasyon görsel ve biyolüminesens puanlama için bir otopsi rehber özetliyor.
Abstract
Renal hücreli karsinom (RCC) yeni deneysel tedavilerin gelişmiş test için önemli zorluklardan biri sadakatle erken ve geç evre metastatik hastalık ilerlemesini özetlemek modellerinin geliştirilmesidir. Tipik tümör implantasyonu modelleri ektopik veya kadavradan primer tümör implantasyonu kullanmak, ancak birkaç klinik ayarını taklit sistemik spontan metastatik hastalığı vardır. Bu protokol RCC hastalığın ilerlemesi hastalara benzer aşamaları geliştirmek için önemli adımlar açıklanır. İlk olarak, ortotopik tümör hücre implantasyonu göstermek için bir genetik olarak özdeş bir modelde yüksek düzeyde metastatik fare tümör hücre hattı kullanır. Yöntem sızıntı ve erken yayılmasını önlemek için Matrigel ile birlikte hücreler ile alt kapsül boşluğa yüzeysel ve iç implantasyonu içerir. Sonraki kritik öncesi ve ameliyat sonrası bakım ile fare, tümör taşıyan böbrek (nefrektomi) eksizyonu için prosedürler açıklanmaktadır. Son olarak, izlemek ve değerlendirmek için gerekli adımları özetliyorMikro-ve de biyolüminesens görüntüleme dahil olmak üzere makro-metastatik hastalık ilerlemesi, sistemik hastalık dağılımı puan için ayrıntılı görsel otopsi kılavuzu sağlar. Bu protokol açıklamanın amacı, gelecekteki tedavi test öngörü değerini artırmak için klinik olarak ilgili metastatik RCC modelleri yaygın kullanımını kolaylaştırmaktır.
Introduction
Renal hücreli karsinom (RCC) olan hastalarda mortalitenin önemli nedeni genellikle böbrek büyüyen bir primer tümörün cerrahi olarak çıkarılması sonrası ortaya sistemik metastatik hastalıktır. Bununla birlikte, farelerde deneysel terapötik değerlendirilmesi, çok az klinik öncesi modellerde tümör metastatik hastalığı, ve daha az hala sadakatle lokalize bir büyüme, cerrahi ve spontan mikro metastatik başlaması ve ilerlemesi 1-3 klinik aşamaları özetlemek. Test Bu boşluk bazen hayvan modellerinde görülen çarpıcı bir anti-tümör etkileri her zaman hastaların 4 benzer başarılı tedavisi tercüme değil, yeni tedavilerin değerlendirilmesinde giderek daha önemli hale gelmiştir. Sonuçlarında tür farklılıklar lokalize ektopik veya kadavradan primer tümör modelleri ve geç evre metastatik hastalık 5-7 arasında ayırıcı ilaç etkilerlere kaynaklanıyor olabilir. RCC durumunda, sadece bir kaç çalışma kurulmuş istihdam var, birgenellikle tümör taşıyan böbrekleri vardı taklit eden hastalar tamamen veya kısmen 2,3 kaldırıldı spontan tekrarlayan hastalığı vardır Nimal protokolleri. Fare modeli test Bu eksiklik için nedenleri değişir. İlk olarak, yüksek maliyet ve hayvan tümör hücre seçimi ve metastaz potansiyeli doğal değişkenlik vardır. (Örneğin, bir insan hücre hattı türetme 8-10 açıklamasına bakınız), örneğin, insan böbrek hücre çizgileri nadiren metastaz eğilimindedir ve ortotopik primer implantasyon ve sürekli olarak yaymak ve uzak bir lezyon meydana türevlerini elde etmek için metastatik seçimi birden fazla tur seçilmelidir . Tersine, bağışıklığı yeterli bir model fare hücreleri agresif olarak davranma eğilimi gösterirler, ve düşük hücre sayıları hemen sistemik yayılmasını 3 azaltmak için Matrigel ile enjekte edilmelidir. İkincisi, teknik doğru implantasyonu, cerrahi rezeksiyon (nefrektomi) performans ve izleme güçlüğü (ve miktarlarının ayarlanması) spontan metastatic büyüme zor olabilir ve (ayrıntılar için Tartışma) Bu tekniğin uygulanması sırasında birçok kritik değişkenler dikkate gerekir. Bu protokolün amacı ortotopik implantasyon, rezeksiyon (nefrektomi), ve spontan metastatik RCC hastalığın izlenmesi temel adımları (yanı sıra potansiyel tuzaklar) tanımlamak ve standart (ve daha yaygın) için bir rehber sunmak için bilimsel laboratuvarlar arasında kullanmaktır Bu deneysel terapötik etkinliğini değerlendirmek.
Protocol
Representative Results
Discussion
Bu protokolün amacı, implantasyon / rezeksiyon teknikleri tanımlamak için bir sinjeneik tümör fare modeli kullanılarak klinik olarak ilgili spontan metastatik hastalık değerlendirmektir. Şu anda, yeni deneysel tedaviler değerlendiren klinik öncesi çalışmaların çoğunluğu metastatik hastalık çalışma dahil değildir ve sadece birkaç primer tümör büyümesi, cerrahi rezeksiyon ve nihai spontan metastatik yayılma aşamaları özetlemek. Bugüne kadar, genetiği fare modelleri (GEMMs) spontan renal …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Biz bu prosedürün geliştirilmesinde teknik yardım ve uzmanlık için Dr Robert S. Kerbel (Toronto Üniversitesi, Sunnybrook Araştırma Enstitüsü, Toronto, Kanada) ve laboratuara minnettarız. Biz de Dr Sandra Sexton ve Laboratuar Hayvan Kaynakları Roswell Park Kanser Enstitüsü Bölümü'ne teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma (JMLE için) Roswell Park Alliance Vakfı bir ödül tarafından desteklenmiştir.
Materials
| DMEM-high glucose with Pyr. And L-Glutamine | Corning | 10-013-CV | |
| FBS | Invitrogen | 10437-028 | |
| 0.25% Trypsin EDTA | Corning | 25-053-CL | |
| 1x DPBS without Calcium & Magnesium | Corning | 21-031-CV | |
| Matrigel | BD Biosciences | 354234 | must be kept on ice |
| Artifical tears-lubricant opthalmic ointment | Akorn Animal Health | 17478-162-35 | |
| Pocket pro pet trimmer | Braintree scientific | CLP9931B | |
| Alcohol swab | VWR | 326895 | |
| Betadine solution swab | VWR | 67618-152-01 | |
| MICRO DISSECTING sissors straight,blunt – 25mm blades – 4.5" | Southpointe surgical | RS-5982 | |
| Iris Forceps, serrated, curved, 10cm long | Kent scientific | INS15915 | need two of these |
| 10µl Hamilton syringe | Hamilton | 7635-01 | |
| 30G, 45 degree, RN needle | Hamilton | 7803-07 | |
| Sterile cotton tipped appicator | VWR | 10805-144 | |
| High temperature cautery kit | Kent scientific | INS500392 | |
| 5-0 coated Vicryl, conventional cutting needle | Ethicon | J834 | |
| Reflex clip applier for 7mm clips | Kent scientific | INS500343 | |
| Reflex clips, 7mm, non-sterile | Kent scientific | INS500344 | |
| Removing forceps, 12cm lone | Kent scientific | INS500347 | |
| 0.9% Sodium Chloride | Baxter Healthcare | 2B1322 | |
| Buprenorphine 0.01mg/mL | |||
| 25G 5/8" needle | VWR | BD305122 | |
| 1mL syringe w/out needle | VWR | BD309659 | |
| D-Luciferin | Gold Bio technology | LUCK-1G |
References
- Francia, G., Cruz-Munoz, W., Man, S., Xu, P., Kerbel, R. S. Mouse models of advanced spontaneous metastasis for experimental therapeutics. Nat. Rev. Cancer. 11, 135-141 (2011).
- Souza, B. M., Chaves, K. B., Chammas, R., Schor, N., Bellini, M. H. Endostatin neoadjuvant gene therapy extends survival in an orthotopic metastatic mouse model of renal cell carcinoma. Biomed. Pharmacother. 66, 237-241 (2012).
- Amagai, Y., et al. Combination therapy of interleukin-2 and sorafenib improves survival benefits and prevents spontaneous pulmonary metastasis in murine renal cell carcinoma models. Jpn. J. Clin. Oncol. 40, 503-507 (2010).
- Steeg, P. S., et al. Preclinical Drug Development Must Consider the Impact on Metastasis. Clin. Cancer Res. 15, 4529-4530 (2009).
- Guerin, E., Man, S., Xu, P. A model of postsurgical advanced metastatic breast cancer more accurately replicates the clinical efficacy of antiangiogenic drugs. Cancer Res. 73, 2743-2748 (2013).
- Day, C. P., Carter, J., Bonomi, C., Hollingshead, M., Merlino, G. Preclinical therapeutic response of residual metastatic disease is distinct from its primary tumor of origin. Int. J. Cancer. 130, 190-199 (2012).
- Ebos, J. M., Kerbel, R. S. Antiangiogenic therapy: impact on invasion, disease progression, and metastasis. Nat. Rev. Clin. Oncol. 8, 210-221 (2011).
- Naito, S., Walker, S. M., Fidler, I. J. In vivo selection of human renal cell carcinoma cells with high metastatic potential in nude mice. Clin. Exp. Metastasis. 7, 381-389 (1989).
- Fidler, I. J., Naito, S., Pathak, S. Orthotopic implantation in essential for the selection, growth and metastasis of human renal cell cancer in nude mice. Cancer Metastasis Rev. 9, 145-165 (1990).
- Saiki, I., et al. Characterization of the invasive and metastatic phenotype in human renal cell carcinoma. Clin. Exp. Metastasis. 9, 551-566 (1991).
- Mohanty, S., Xu, L. Experimental metastasis assay. J. Vis. Exp. 42 (1942), (2010).
- Nunez-Cruz, S., Connolly, D. C., Scholler, N. An orthotopic model of serous ovarian cancer in immunocompetent mice for in vivo tumor imaging and monitoring of tumor immune responses. J. Vis. Exp. (45), (2010).
- Ebos, J. M., et al. Accelerated metastasis after short-term treatment with a potent inhibitor of tumor angiogenesis. Cancer Cell. 15, 232-239 (2009).
- Yang, O. C., Maxwell, P. H., Pollard, P. J. Renal cell carcinoma: translational aspects of metabolism and therapeutic consequences. Kidney Int. 84 (4), 667-681 (2013).
