JoVE Journal > Biology
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Results
Discussion
Disclosures
Acknowledgements
Materials
References
Automatic Translation
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
Biology

قياس خارج الخلية ايون تدفقاتها باستخدام ايون انتقائية مسرى مكروي تقنية الرجوع الذاتي

Published: May 03, 2015
doi:
10.3791/52782
, , , ,
1Department of Dermatology, Institute for Regenerative Cures,University of California, Davis, 2Departamento de Biologia, Centro de Biologia Molecular e Ambiental,Universidade do Minho, 3Department of Neurology and Center for Neuroscience,University of California, Davis Imaging of Dementia and Aging Laboratory, 4Department of Ophthalmology, Institute for Regenerative Cures,University of California, Davis

Summary

Transporters in cell membranes allow differential segregation of ions across cell membranes or cell layers and play crucial roles during tissue physiology, repair and pathology. We describe the ion-selective self-referencing microelectrode that allows the measurement of specific ion fluxes at single cells and tissues in vivo.

Abstract

يتم تضمين الخلايا من الحيوانات والنباتات والخلايا واحدة بحاجز يسمى غشاء الخلية التي تفصل بين السيتوبلازم من الخارج. طبقات الخلية مثل ظهائر أيضا تشكيل الحاجز الذي يفصل بين الداخل من الخارج أو حجرات مختلفة من الكائنات المتعددة الخلايا. ومن السمات الرئيسية لهذه الحواجز هي توزيع الفرق الأيونات عبر أغشية الخلايا أو طبقات الخلية. خاصيتين تسمح هذا التوزيع: 1) الأغشية وظهائر عرض النفاذية الانتقائية للأيونات محددة؛ 2) يتم نقل الأيونات خلال مضخات عبر أغشية الخلايا وطبقات الخلية. هذه الخصائص تلعب دورا حاسما في الحفاظ على وظائف الأعضاء والأنسجة بمثابة إشارات العظة بعد الضرر، خلال إصلاح، أو في ظل حالة المرضية. إلى الرجوع النفس مسرى مكروي ايون الانتقائي يسمح قياسات لتدفقات معينة من أيونات مثل الكالسيوم والبوتاسيوم أو الصوديوم عند مستويات الخلايا والأنسجة واحدة. يحتوي على مسرى مكروي كوكتيل حامل الأيون الذي هوقابلة للاختراق بشكل انتقائي إلى أيون معين. الحل ملء داخلي يحتوي على تركيز مجموعة من الأيونات في المصالح. يتم تحديد الجهد الكهربائي من مسرى مكروي من التركيز الخارجي للأيون. كما يختلف تركيز أيون، وإمكانات مسرى مكروي التغييرات بوصفها وظيفة من سجل النشاط أيون. عندما انتقلت ذهابا وإيابا بالقرب من مصدر أو بالوعة للأيون (أي في التدرج تركيز بسبب تدفق أيون) إمكانية مسرى مكروي يتقلب في اتساع يتناسب مع تدفق أيون / التدرج. مكبر للصوت تضخيم الإشارة مسرى مكروي ويتم تسجيل الإخراج على جهاز الكمبيوتر. ومن ثم يمكن حساب تدفق الأيونات بالقانون فيك من نشر باستخدام تذبذب القطب المحتملين، ورحلة من مسرى مكروي، وغيرها من المعالم مثل حركة الايونات معين. في هذه الورقة، ونحن تصف بالتفصيل منهجية لقياس تدفقات أيون الخلية باستخدام-الرجوع النفس مسرى مكروي لايون انتقائيةد تقديم بعض النتائج التمثيلية.

Introduction

ويحيط كل الخلايا الحيوانية التي كتبها طبقة ثنائية الغشاء الدهني الذي يفصل السيتوبلازم من البيئة الخارجية. تحتفظ الخلية إمكانات غشاء الكهربائية، سلبية في الداخل، عن طريق النقل النشط لأيونات 1. غشاء المحتملة هي مصدر الطاقة المخزونة التي الخلية يمكن الاستفادة لتشغيل الأجهزة الجزيئية المختلفة في غشاء 2. الخلايا العصبية والخلايا منفعل أخرى لديها إمكانات غشاء كبيرة. افتتاح السريع للقنوات الصوديوم ينهار غشاء المحتملة (الاستقطاب) وتنتج إمكانات العمل التي يتم نقلها على طول العصبون 2. وبصرف النظر عن هذه التغييرات الكهربائية السريعة، والعديد من الأنسجة والأعضاء تولد والحفاظ على إمكانات كبيرة الكهربائية على المدى الطويل. على سبيل المثال، والجلد وظهائر القرنية توليد والحفاظ على الإمكانات عبر الظهارية والتيارات الكهربائية خارج الخلية من خلال ضخ الاتجاه من الأيونات (أساسا الصوديوم وكلوريد) 3.

خيمة "> بينما قياسات الذاتية التيار الكهربائي خارج الخلية باستخدام مسبار تهتز 4-6 وقياسات غشاء أو عبر الظهارية إمكانات استخدام نظام مسرى مكروي 10/7 يتيح قياس المعلمات الكهربائية لأغشية الخلايا وطبقات الخلايا الظهارية، فإنها لا تعطي إشارة إلى الأنواع أيون المعنية.

يمكن الميكروية مع حامل الأيون انتقائية قياس تركيز أيون معين في الحل. يمكن قياس التدرجات أيون أو التمويه مع اثنين أو أكثر من الأقطاب الكهربائية في مواقع مختلفة. ومع ذلك، فإن الانجراف الجهد لا يتجزأ من كل مسبار تكون مختلفة، مما تسبب قياسات غير دقيقة أو حتى الكشف عن الانحدار الذي لم يكن موجودا. A القطب واحد المستخدمة في وضع "الرجوع إلى الذات" حيث أنه يتحرك في التردد المنخفض بين نقطتين يحل هذه المشكلة. الآن تدفق الأيونات يمكن أن ينظر إليه على خلفية الانجراف إشارة بطيئة وثابتة نسبيا (انظر الشكل 3B). </P>

يستخدم نظام قياس حساسة ليثيوم-الميكروية الرجوع النفس ايون الانتقائي للكشف عن تدفقات خارج الخلية صغيرة من الأيونات قريبة من الأنسجة أو الخلايا وحيدة. ويتكون النظام من مكبر للصوت الذي يعالج الإشارة من مسرى مكروي والسائر المحركات الصغيرة والسائق للسيطرة على حركة مسرى مكروي. يتم توصيل مسرى مكروي ايون انتقائية والقطب المرجعية التي تغلق الدائرة إلى مكبر للصوت عن طريق headstage قبل مكبر للصوت (الشكل 1A). برامج الكمبيوتر يحدد معالم الحركة مسرى مكروي (تردد، وبعد المسافة) ويسجل أيضا إخراج مكبر للصوت. يتحكم المحرك السائر حركة مسرى مكروي عبر micropositioner ثلاثي الأبعاد. وقد تطورت A التردد المنخفض تهتز ايون انتقائية مسرى مكروي لأول مرة في 1990 لقياس تدفق الكالسيوم محددة 11. وكذلك الكالسيوم والكوكتيلات حامل الأيون الوصول تجاريا متاحة الآن لجعل ميكرoelectrodes حساسية للصوديوم وكلوريد البوتاسيوم والهيدروجين والمغنيسيوم، نترات الأمونيوم، الفلورايد، والليثيوم أو الزئبق.

في الأساس، وايون انتقائية تقنية مسرى مكروي-الرجوع النفس تحويل نشاط أيون معين المذاب في محلول إلى الجهد الكهربائي، والتي يمكن أن تقاس الفولتميتر. كوكتيل حامل الأيون هو السائل إمتزاج (العضوية، محبة للدهون) المرحلة مع خصائص التبادل الأيوني. على حامل الأيون مجمعات انتقائي (الربط) أيونات معينة عكسية ونقل لهم بين محلول مائي الواردة في مسرى مكروي (بالكهرباء) ومحلول مائي التي يتم مغمورة مسرى مكروي (1D الشكل). هذا نقل أيون يؤدي إلى التوازن الكهروكيميائية ويتم قياس الاختلاف من الجهد الكهربائي بين مسرى مكروي والقطب المرجعية من قبل الفولتميتر. الجهد يتناسب مع لوغاريتم النشاط أيون معين وفقا لنرنست هquation السماح للحساب تركيز أيون (الشكل 2A و B).

في الوقت الحاضر، العديد من النظم تسمح قياس تدفق الأيونات باستخدام مفهوم أو مبدأ مماثل. على سبيل المثال، القطب تقنية المسح الضوئي ايون انتقائية (SIET) 12،13 أو مسرى مكروي ايون الجريان تقدير (MIFE) تقنية وضعتها نيومان وShabala 14-16 متاحة تجاريا وتستخدم على نطاق واسع من قبل الأوساط البحثية من أجل تحديد أيون محدد الطلاءات التي تحدث في غشاء الخلايا والأنسجة عبر مجموعة متنوعة من الحيوانات والنباتات ونماذج خلية حية واحدة. وقد استخدمت الميكروية ايون انتقائية لقياس الهيدروجين والبوتاسيوم والكالسيوم تدفق عبر جذور النباتات 17، تدفق الكلوريد في الفئران الشرايين الدماغية 18 و 19 في أنابيب حبوب اللقاح، تدفق الهيدروجين في خلايا الشبكية تزلج 20، تدفق الكالسيوم في العظام بالنسبة للفئران 21، أيون مختلف الفيض في خيوط فطرية 22 و في صفي القرنية 23، وأخيرا تدفق الكالسيوم خلال الجرح خلية واحدة الشفاء 12،24. انظر أيضا الاستعراض التالي للحصول على معلومات مفصلة على الرجوع النفس الميكروية ايون الانتقائي 25.

تتناول المقالة التالية بالتفصيل كيفية إعداد وتنفيذ قياس الذاتية تدفقات أيون الخلية باستخدام-الرجوع النفس تقنية مسرى مكروي ايون انتقائية على مستوى خلية واحدة.

Protocol

1. ايون انتقائية إعداد مسرى مكروي-الرجوع الذاتي إعداد ايون انتقائية مسرى مكروي الحرارة سحب رقيقة الشعرية البورسليكات الجدران من دون خيوط (1.5 ملم القطر الخارجي، 1.12 مم ال?…

Representative Results

لقد أظهرنا سابقا أن تدفق الكالسيوم يظهر بعد خلية واحدة اصابة 24 اخرين. لذا سألنا عما إذا تدفقات ايون أخرى تحدث عند إصابة خلية واحدة. استخدمنا X. المورق البويضة، وهذا نموذج راسخة لخلية واحدة التئام الجروح 30-34 وتسجيل الكهربية 24،35-39. ومن المثير للاهت…

Discussion

الخطوات الأكثر أهمية لقياس النجاح في تدفقات أيون الخلية في الجسم الحي هي: الحد من الضوضاء، وتلفيق الصحيح للالميكروية ايون انتقائية والمرجعية القطب، وتحديد المواقع من العينة وكل من الأقطاب الكهربائية.

من أجل الحد من الضوضاء…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

This work was supported by National Science Foundation grant MCB-0951199, and in part by the NIH grant EY01910, California Institute of Regenerative Medicine grants RB1-01417 and by the Fundação para a Ciência e Tecnologia (FCT) grant SFRH/BD/87256/2012.

Materials

IonAmp   BioCurrents Research Center, Woods Hole, MA, USA none amplifier created by the BioCurrents Research Center, Woods Hole, MA, USA; Similar system can be purchased from “XBL function matters” (http://www.xuyue.org/) or from “YoungerUSA” (http://www.youngerusa.com/) or from Applicable Electronics(http://www.applicableelectronics.com/)
IonAmp32   BioCurrents Research Center, Woods Hole, MA, USA none software created by the BioCurrents Research Center, Woods Hole, MA, USA; Similar system can be purchased from “XBL function matters” (http://www.xuyue.org/) or from “YoungerUSA” (http://www.youngerusa.com/) or from Applicable Electronics(http://www.applicableelectronics.com/)
Headstage pre-amplifier  BioCurrents Research Center, Woods Hole, MA, USA INA116 BSR Voltage Follower INA116, designed by the BioCurrents Research Center, Woods Hole, MA, USA; Similar system can be purchased from “XBL function matters” (http://www.xuyue.org/) or from “YoungerUSA” (http://www.youngerusa.com/) or from Applicable Electronics(http://www.applicableelectronics.com/)
MicroStep Driver  BioCurrents Research Center, Woods Hole, MA, USA none three MicroStep drivers are required for X, Y and Z-positioning; created by the BioCurrents Research Center, Woods Hole, MA, USA; Similar system can be purchased from “XBL function matters” (http://www.xuyue.org/) or from “YoungerUSA” (http://www.youngerusa.com/) or from Applicable Electronics(http://www.applicableelectronics.com/)
Manual micropositioner   World Precision Instruments  Model KITE-R Similar system can be purchased from Applicable Electronics(http://www.applicableelectronics.com/)
Magnetic stand    World Precision Instruments Model M10 Similar system can be purchased from Applicable Electronics(http://www.applicableelectronics.com/)
Vibration isolation table   Newport Inc.      Model VW-3036-OPT-023040 Similar system can be purchased from Applicable Electronics(http://www.applicableelectronics.com/)
Part of three dimentional micropositioner: angle bracket, 90°, slotted faces Newport Inc.      Model 360-90 Assemblage of the three dimantionnal micropositionner requires also Three electric rotary motors for X, Y, Z control, MPH-1 mounting arm with MCA-2 adjustable-angle post and Various Newport connectors and screws to bolt onto vibration table
Part of three dimentional micropositioner: Peg-Joining Dovetail Stage 0.5 inch X Travel Newport Inc.      460PD-X none
Part of three dimentional micropositioner: Quick-Mount Linear Stage, 0.5 inch XY Travel Newport Inc. 460A-XY none
Kwik-Fil thin walled borosilicate glass capillaries without filament  World Precision Instruments  TW150-4 none
Electrode puller  Narishige  PC-10 none
Metal rack Made in-house none Metal electrode holder made in-house by drilling 2 mm wide holes half centimeter spaced in a 10cm by 15cm rectangular base of steel
Oven QL Model 10 Lab Oven none
Silanization solution I  Sigma-Aldrich 85126 Hazardous, handle as recommended by provider 
Glass Petri dish; Pyrex Fisher Scientific 316060 none
Electrode/micropipette storage jar World Precision Instruments  E215 none
Glass dessicator Fisher Scientific 08-595E Contains Drierite dessicant (W.A. Hammond Drierite Co. Ltd, Xenia, OH, USA). Place petroleum jelly on the seal to make it airtight.
Plastic Pasteur pipette  Fisher Scientific 11597722 none
Bunsen burner Fisher Scientific S97329 none
Microscope slide Sigma-Aldrich S8902 none
Straight microelectrode holder Warner Instruments QSW-A15P with a gold 1 mm male connector and Ag/AgCl wire
Straight microelectrode holder  World Precision Instruments MEH3S with a AgCl(Ag+)pellet inside and a gold 2 mm male connector 
6 cm Petri dish VWR 60872-306 none
Nitex mesh Dynamic Aqua-Supply Ltd. NTX750 none
Glue; Loctite epoxy VWR 500043-451 Mix glue and hardener in equal parts in a plastic weighing boat and mix thoroughly. Sets quickly but leave at RT for 24 h for full curing
Deionized water  Sigma-Aldrich 99053 none
Sodium Chloride Sigma-Aldrich S7653 none
Potassium Chloride Sigma-Aldrich P9333 none
Calcium Chloride Sigma-Aldrich C1016 none
Magnesium Chloride Sigma-Aldrich M8266 none
Hepes Sigma-Aldrich H3375 none
Sodium Hydroxyde Sigma-Aldrich S8045 none
Potassium Acetate Sigma-Aldrich P1190 none
Agarose Sigma-Aldrich A9539 none
DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Weber, W. M., Liebold, K. M., Clauss, W. Amiloride-sensitive Na+ conductance in native Xenopus oocytes. Biochimica et biophysica acta. 1239, 201-206 (1995).
  2. McCaig, C. D., Song, B., Rajnicek, A. M. Electrical dimensions in cell science. Journal of cell science. 122, 4267-4276 (2009).
  3. Zhao, M. Electrical fields in wound healing-An overriding signal that directs cell migration. Seminars in cell & developmental biology. 20, 674-682 (2009).
  4. Jaffe, L. F., Nuccitelli, R. An ultrasensitive vibrating probe for measuring steady extracellular currents. The Journal of cell biology. 63, 614-628 (1974).
  5. Reid, B., Nuccitelli, R., Zhao, M. Non-invasive measurement of bioelectric currents with a vibrating probe. Nature protocols. 2, 661-669 (2007).
  6. Reid, B., Zhao, M. Measurement of bioelectric current with a vibrating probe. Journal of visualized experiments : JoVE. , (2011).
  7. Neher, E., Sakmann, B. Single-channel currents recorded from membrane of denervated frog muscle fibres. Nature. 260, 799-802 (1976).
  8. Moore, J. W. The patch clamp: single-channel recording. Science. 224, 50-51 (1984).
  9. Brown, A. L., Johnson, B. E., Goodman, M. B. Patch clamp recording of ion channels expressed in Xenopus oocytes. Journal of visualized experiments. , (2008).
  10. McCaig, C. D., Robinson, K. R. The ontogeny of the transepidermal potential difference in frog embryos. Developmental biology. 90, 335-339 (1982).
  11. Kuhtreiber, W. M., Jaffe, L. F. Detection of extracellular calcium gradients with a calcium-specific vibrating electrode. The Journal of cell biology. 110, 1565-1573 (1990).
  12. Cai, G., Cresti, M., Moscatelli, A. The use of the vibrating probe technique to study steady extracellular currents during pollen germination and tube growth. Fertilisation in Higher Plants: molecular and cytological aspects. , 235-252 (1999).
  13. Kunkel, J. G., Xu, Y., Shipley, A. M., Feijó, J. A. The use of non-invasive ion-selective microelectrode techniques for the study of plant development. Plant Electrophysiology – Theory and Methods. (ed Volkov AG. , 109-137 (2006).
  14. Ordonez, N. M., Shabala, L., Gehring, C., Shabala, S. Noninvasive microelectrode ion flux estimation technique (MIFE) for the study of the regulation of root membrane transport by cyclic nucleotides. Methods in molecular biology. 1016, 95-106 (2013).
  15. Tegg, R. S., Melian, L., Wilson, C. R., Shabala, S. Plant cell growth and ion flux responses to the streptomycete phytotoxin thaxtomin A: calcium and hydrogen flux patterns revealed by the non-invasive MIFE technique. Plant & cell physiology. 46, 638-648 (2005).
  16. Newman, I. A. Ion transport in roots: measurement of fluxes using ion-selective microelectrodes to characterize transporter function. Plant, cell & environment. 24, 1-14 (2001).
  17. Kochian, L. V., Shaff, J. E., Kuhtreiber, W. M., Jaffe, L. F., Lucas, W. J. Use of an extracellular, ion-selective, vibrating microelectrode system for the quantification of K(+), H (+), and Ca (2+) fluxes in maize roots and maize suspension cells. Planta. 188, 601-610 (1992).
  18. Doughty, J. M., Langton, P. D. Measurement of chloride flux associated with the myogenic response in rat cerebral arteries. The Journal of physiology. 534, 753-761 (2001).
  19. Messerli, M. A., Smith, P. J., Lewis, R. C., Robinson, K. R. Chloride fluxes in lily pollen tubes: a critical reevaluation. The Plant journal : for cell and molecular biology. 40, 799-812 (2004).
  20. Molina, A. J., et al. Neurotransmitter modulation of extracellular H+ fluxes from isolated retinal horizontal cells of the skate. The Journal of physiology. 560, 639-657 (2004).
  21. Marenzana, M., Shipley, A. M., Squitiero, P., Kunkel, J. G., Rubinacci, A. Bone as an ion exchange organ: evidence for instantaneous cell-dependent calcium efflux from bone not due to resorption. Bone. 37, 545-554 (2005).
  22. Lew, R. R. Ionic currents and ion fluxes in Neurospora crassa hyphae. Journal of experimental botany. 58, 3475-3481 (2007).
  23. Vieira, A. C., et al. Ionic components of electric current at rat corneal wounds. PloS one. 6, e17411 (2011).
  24. Luxardi, G., Reid, B., Maillard, P., Zhao, M. Single cell wound generates electric current circuit and cell membrane potential variations that requires calcium influx. Integrative biology : quantitative biosciences from nano to macro. 6, 662-672 (2014).
  25. Smith, P. J. S., Sanger, R. H., Messerli, M. A., Michael, A. C., Borland, L. H. . Electrochemical Methods for Neuroscience. , (2007).
  26. Smith, P. J., Hammar, K., Porterfield, D. M., Sanger, R. H., Trimarchi, J. R. Self-referencing, non-invasive, ion selective electrode for single cell detection of trans-plasma membrane calcium flux. Microscopy research and technique. 46, 398-417 (1999).
  27. Messerli, M. A., Smith, P. J. Construction theory, and practical considerations for using self-referencing of Ca(2+)-selective microelectrodes for monitoring extracellular Ca(2+) gradients. Methods in cell biology. 99, 91-111 (2010).
  28. Chambers, J., Hastie, T., Pregibon, D., Momirović, K., Mildner, V. Ch. 48. Compstat. , 317-321 (1990).
  29. Chambers, J. M., Cleveland, W. S., Kleiner, B., Tukey, P. A. . Graphical methods for data analysis. , (1983).
  30. Burkel, B. M., Benink, H. A., Vaughan, E. M., von Dassow, G., Bement, W. M. A Rho GTPase signal treadmill backs a contractile array. Developmental cell. 23, 384-396 (2012).
  31. Bement, W. M., Mandato, C. A., Kirsch, M. N. Wound-induced assembly and closure of an actomyosin purse string in Xenopus oocytes. Current biology : CB. 9, 579-587 (1999).
  32. Mandato, C. A., Bement, W. M. Contraction and polymerization cooperate to assemble and close actomyosin rings around Xenopus oocyte wounds. The Journal of cell biology. 154, 785-797 (2001).
  33. Benink, H. A., Bement, W. M. Concentric zones of active RhoA and Cdc42 around single cell wounds. The Journal of cell biology. 168, 429-439 (2005).
  34. Simon, C. M., Vaughan, E. M., Bement, W. M., Edelstein-Keshet, L. Pattern formation of Rho GTPases in single cell wound healing. Molecular biology of the cell. 24, 421-432 (2013).
  35. Petersen, C. C., Dupont, G. The initiation of a calcium signal in Xenopus oocytes. Cell calcium. 16, 391-403 (1994).
  36. Horisberger, J. D., Lemas, V., Kraehenbuhl, J. P., Rossier, B. C. Structure-function relationship of Na,K-ATPase. Annual review of physiology. 53, 565-584 (1991).
  37. Miledi, R. A calcium-dependent transient outward current in Xenopus laevis oocytes. Proceedings of the Royal Society of London. Series B, Containing papers of a Biological character. Royal Society. , 491-497 (1982).
  38. Miledi, R., Parker, I. Chloride current induced by injection of calcium into Xenopus oocytes. The Journal of physiology. 357, 173-183 (1984).
  39. Parker, I., Miledi, R. A calcium-independent chloride current activated by hyperpolarization in Xenopus oocytes. Proceedings of the Royal Society of London. Series B, Containing papers of a Biological character. Royal Society. 233, 191-199 (1988).
  40. Costa, P. F., Emilio, M. G., Fernandes, P. L., Ferreira, H. G., Ferreira, K. G. Determination of ionic permeability coefficients of the plasma membrane of Xenopus laevis oocytes under voltage clamp. The Journal of physiology. 413, 199-211 (1989).
  41. Adams, D. S., Levin, M. General principles for measuring resting membrane potential and ion concentration using fluorescent bioelectricity reporters. Cold Spring Harbor protocols. 2012, 385-397 (2012).
  42. Porterfield, D. M. Measuring metabolism and biophysical flux in the tissue, cellular and sub-cellular domains: recent developments in self-referencing amperometry for physiological sensing. Biosensors. 22, 1186-1196 (2007).
  43. McLamore, E. S., et al. A self-referencing glutamate biosensor for measuring real time neuronal glutamate flux. Journal of neuroscience methods. 189, 14-22 (2010).
  44. Yin, M., et al. Highly sensitive and fast responsive fiber-optic modal interferometric pH sensor based on polyelectrolyte complex and polyelectrolyte self-assembled nanocoating. Analytical and bioanalytical chemistry. 399, 3623-3631 (2011).
  45. Chatni, M. R., Porterfield, D. M. Self-referencing optrode technology for non-invasive real-time measurement of biophysical flux and physiological sensing. The Analyst. 134, 2224-2232 (2009).
  46. McLamore, E. S., Jaroch, D., Chatni, M. R., Porterfield, D. M. Self-referencing optrodes for measuring spatially resolved, real-time metabolic oxygen flux in plant systems. Planta. 232, 1087-1099 (2010).
  47. McLamore, E. S., et al. A self referencing platinum nanoparticle decorated enzyme-based microbiosensor for real time measurement of physiological glucose transport. Biosensors & bioelectronics. 26, 2237-2245 (2011).

Tags

Ion-selective Self-referencing MicroelectrodeExtracellular Ion FluxIon TransportCell MembraneCell LayerIon GradientFick’s Law Of DiffusionIon Flux MeasurementCalciumPotassiumSodium
check_url/52782?article_type=t

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Cite This Article
Luxardi, G., Reid, B., Ferreira, F., Maillard, P., Zhao, M. Measurement of Extracellular Ion Fluxes Using the Ion-selective Self-referencing Microelectrode Technique. J. Vis. Exp. (99), e52782, doi:10.3791/52782 (2015).
Download Citation
Reprints and Permissions

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image