परीक्षण के लिए चिकी हार्ट आक्रमण परख कैंसर कोशिकाओं के invasiveness और संभावित विरोधी आक्रामक यौगिकों की गतिविधि
Summary
यहाँ, हम तीन आयामों में सामान्य ऊतक टुकड़े रहने में ट्यूमर कोशिकाओं के आक्रमण का अध्ययन करने के लिए एक प्रोटोकॉल उपस्थित थे। यह अंग संस्कृति तकनीक मुख्य रूप से इन विट्रो में संभावित विरोधी आक्रामक दवाओं का परीक्षण करने के लिए लागू किया जाता है।
Abstract
लड़की दिल परख के लक्ष्य को तीन आयामों में ट्यूमर आक्रमण का अध्ययन करने के लिए एक प्रासंगिक अंग संस्कृति विधि का प्रस्ताव है। परख आक्रामक और गैर इनवेसिव कोशिकाओं के बीच भेद, और ट्यूमर आक्रमण पर परीक्षण यौगिकों के प्रभाव के अध्ययन के लिए सक्षम बनाता है सकते हैं। कैंसर की कोशिकाओं को – या तो समुच्चय या एकल कक्षों के रूप में – भ्रूण लड़की दिल के टुकड़े के साथ सामना कर रहे हैं। कुछ दिनों या हफ्तों के लिए निलंबन में अंग संस्कृति के बाद से भिड़ने संस्कृतियों तय कर रहे हैं और histological विश्लेषण के लिए आयल में एम्बेडेड। कैंसर की कोशिकाओं और सामान्य ऊतकों के बीच तीन आयामी बातचीत फिर hematoxylin-eosin के साथ या हृदय के ऊतकों में epitopes या भिड़ने कैंसर कोशिकाओं के लिए immunohistochemical धुंधला के बाद दाग धारावाहिक वर्गों से खंगाला है। परख कैंसर आक्रमण कैंसर की कोशिकाओं और उनके पड़ोसी स्ट्रोमल मेजबान तत्वों (myofibroblasts, endoth के बीच आणविक बातचीत का नतीजा है कि हाल ही में अवधारणा के साथ संगत हैelial कोशिकाओं, बाह्य मैट्रिक्स घटकों, आदि)। यहाँ, इस स्ट्रोमल वातावरण में एक जीवित ऊतक टुकड़ा के रूप में कैंसर कोशिकाओं के लिए पेशकश की है। परख की प्रासंगिकता को सहायक पहलुओं एकाधिक रहे हैं। प्रगतिशील व्यवसाय और प्रतिस्थापन समय में और मेजबान ऊतक की जगह है, और invasiveness और भिड़ने कोशिकाओं के vivo में गैर invasiveness आम तौर पर परख के परिणाम के साथ संबद्ध: परख में आक्रमण कैंसर के आक्रमण के मानदंडों के अनुसार है। इसके अलावा, विवो में कोशिकाओं के आक्रमण के पैटर्न, पैथोलॉजिस्ट द्वारा परिभाषित के रूप में, परख में histological छवियों में दिखाई देता है। कई संभावित विरोधी आक्रामक जैविक congener यौगिकों के साथ प्राप्त परिणामों के मात्रात्मक संरचना गतिविधि संबंध (QSAR) विश्लेषण क्लिनिक में प्रयोग किया जाता flavonoids और chalcones, और ज्ञात विरोधी मेटास्टैटिक दवाओं के लिए संरचना-गतिविधि के संबंध (जैसे, सूक्ष्मनलिका अवरोधकों के अध्ययन की अनुमति दी ) के रूप में अच्छी तरह से परख में आक्रमण को रोकना। Howeveआर, परख कैंसर आक्रमण करने के लिए खाते प्रतिरक्षात्मक योगदान नहीं ले सकती है।
Introduction
आक्रमण घातक ट्यूमर की पहचान है। इस गतिविधि आसपास के ऊतकों के विनाश की ओर जाता है, लेकिन यह भी मेटास्टेसिस गठन में फंसा हुआ ही नहीं। कैंसर रोगियों के आक्रमण और मेटास्टेसिस, और कुशल विरोधी इनवेसिव उपचार से मरने के बाद अभी भी ट्यूमर कोशिकाओं के आक्रमण विकसित किया गया है कि नकल दुर्लभ, प्रयोगशाला assays के हैं। लड़की दिल परख के लक्ष्य को तीन आयामों में ट्यूमर आक्रमण का अध्ययन करने के लिए एक प्रासंगिक अंग संस्कृति विधि का प्रस्ताव है। परख आक्रामक और गैर इनवेसिव कोशिकाओं के बीच भेद, और ट्यूमर आक्रमण पर परीक्षण यौगिकों के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए अनुमति देता है।
परख के उपयोग के पीछे तर्क यह है कि ट्यूमर नियोप्लास्टिक कोशिकाओं लगातार उनके स्ट्रोमा (मेजबान कोशिकाओं और बाह्य मैट्रिक्स) के साथ बातचीत जहां पारिस्थितिकी प्रणालियों रहे हैं कि वास्तविक अवधारणा है, और इन आणविक बातचीत आक्रमण के माध्यम से कहा कि ठीक से देखते-1 है। तो, परख में ट्यूमर कोशिकाओं Livi के साथ सामना कर रहे हैंट्यूमर कोशिकाओं द्वारा आक्रमण के लिए substrates के रूप में, लेकिन यह भी stromal कोशिकाओं और मैट्रिक्स तत्वों के विभिन्न प्रकार के एक स्रोत के रूप में न केवल सेवा करते हैं जो एनजी भ्रूण लड़की दिल के टुकड़े 2,। लड़की दिल myocytes, fibroblasts और endothelial कोशिकाओं होता है, और बाह्य मैट्रिक्स laminin, फ़ाइब्रोनेक्टिन और कोलेजन के विभिन्न प्रकार से बना है। इस रास्ते में, तीन आयामी अंग संस्कृति तकनीक रोगी ट्यूमर के आक्रमण में फंसा कई सेलुलर और आणविक मुलाकातों को शामिल किया गया।
लड़की दिल परख का मुख्य लाभ स्ट्रोमल प्रभाव के कार्यान्वयन है। इस पहलू तहखाने झिल्ली 3 या मध्य मैट्रिक्स 4 अणुओं से बना निर्जीव जैल में ट्यूमर सेल आक्रमण के आधार पर कर रहे हैं कि इन विट्रो में अन्य आक्रमण assays में अधिक से अधिक पूरा हो गया है। अंग संस्कृति प्रयोग के रूप में पाया ट्यूमर कोशिकाओं और सामान्य रहने मेजबान ऊतक के बीच टकराव की अवधारणा कई द्वारा शुरू किया गया हैजर्मनी में 7 वोल्फ और श्नाइडर फ्रांस 5 में, यूनाइटेड किंगडम 6 में Easty और Easty, और Schleich सहित लेखकों। उद्धृत तरीकों पर लड़की दिल आक्रमण परख के दो तकनीकी फायदे टुकड़े की मात्रा आसानी से मानकीकृत किया जा सकता है, और वे अंग संस्कृति के दौरान कार्यात्मक अखंडता की निगरानी की अनुमति देता है जो सिकुड़ा, रहना है। वे आसानी से अंडे की बाँझ सामग्री से विच्छेदित किया जा सकता है, क्योंकि इसके अलावा, एवियन भ्रूण पसंद कर रहे हैं। परख ट्यूमर कोशिकाओं के लिए आस-पास के एक जटिल स्ट्रोमल की पेशकश के द्वारा लड़की chorioallantois झिल्ली परख करने के लिए 8 वैचारिक समानता है।
परख सफलतापूर्वक इस तरह 9 और HCT-8 (colonic) 10 सेल लाइन परिवारों एमसीएफ-7 (स्तन) के रूप में ही मानव ट्यूमर से आक्रामक और गैर इनवेसिव सेल वेरिएंट के बीच भेद करने के लिए लागू किया गया है। तकनीक के रूप में अच्छी तरह से संभावित विरोधी आक्रामक यौगिकों का परीक्षण करने के लिए उपयोगी है <suपी> 11,12। आगे बताया गया है, यह छोटे कार्बनिक अणुओं की संरचना गतिविधि संबंधों की स्थापना के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। परख, हालांकि, खाते में कैंसर आक्रमण करने के लिए प्रतिरक्षा कोशिकाओं के योगदान को नहीं ले करता है। यह तकनीक क्योंकि जोड़तोड़ की उच्च संख्या, परख रन की सीमित संख्या (अधिकतम 30 संस्कृतियों) और लंबी बारी के आसपास समय (लगभग 1 माह) के एक उच्च throughput विश्लेषण प्रणाली के रूप में नहीं माना जा सकता है कि जोर दिया जाना चाहिए।
Protocol
Representative Results
Discussion
PHFs की तैयारी के दौरान, टुकड़े निलंबन में नहीं रह सकते हैं, लेकिन पोत दीवार का पालन करना; इस संस्कृति के माध्यम से की मात्रा को बढ़ाने के द्वारा दूर किया जा सकता है। PHFs की संख्या बहुत कम है और उनके आकार बहुत ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
We thank Marleen De Meulemeester for demonstrating the assay technique in the video film. B. I. R. is a Postdoctoral Research Fellow of the Research Foundation – Flanders (FWO – Vlaanderen). L.M.M. is a recipient of an Emmanuel van der Schueren grant from the Flemish League against Cancer (Vlaamse Liga tegen Kanker).
Materials
| Ringer's salt solution | Braun | CEO123 | |
| Bacto-agar | Becton Dickinson | 214010 | |
| Tris-(hydroxymethyl)-aminomethaan Analar | VWR | 103157P | |
| BSA : albumin from bovine serum, cohn V fract. | Sigma | A4503-500G | |
| MEM-Rega 3 | Life Technologies | 19993013 | |
| Gyrotory shakers | New Brunswick Scientific | G10 and G33 | |
| Erlenmeyer flasks 50 ml | Novolab | 92717 | |
| Glass Petri dishes | Novolab | 68516 | |
| Iridectomy scissors | Rumex | 11-0625 | |
| Macroscope with calibrated ocular grid | Wild | 157702 | |
| Paraffin wax | International Medical products | 8599956 | |
| Eosin Y | Sigma | 230251-25g | |
| Harris' hematoxylin | Sigma | HHS32-1L | |
| Coverslipping resin (Tissue-Tek) | Sakura | 4494 | |
| Paraffin melting apparatus | GFL | 1052 | |
| Microtome for paraffin sectioning | Reichert | ||
| Stppers for Erlemeyer flasks with gas in- and outlets | Novolab | 2602421 and 260243 | |
| Diaminobenzidine | Sigma | D8001 | |
| REAX rocking table | Heidolph | 54131 | |
| 24-well tissue dishes | VWR | NUNC142475 | |
| Ophtalmological enucleation spoon | Rumex | 16-060 | |
| Sharp forceps | Rumex | 4-111T | |
| Blunt forceps | Nickel-Electro LTD | 7112 | |
| Erlenmeyer flasks 5 ml | Novolab | 211901 | |
| Microscope slides washed and degreased | International Medical products | 8613908 |
References
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