Burada, üç boyutta normal doku parçaları canlı olarak tümör hücrelerinin istilasını incelemek için bir protokol mevcut. Bu organ kültürü tekniği, özellikle in vitro koşullarında potansiyel anti-invasif ilaçlar test etmek için uygulanır.
Civciv, kalp deneyin amacı, üç boyutlu olarak tümör istilasını incelemek için ilgili bir organ kültür yöntemi sunmaktır. Deney invaziv ve invazif olmayan hücreler arasında ayrım ve tümör invazyonu üzerinde test bileşiklerinin etkileri etüdüne olanak sağlamıştır olabilir. Kanser hücreleri – ya agrega veya tek hücreleri gibi – embriyonik civciv kalp parçaları ile karşı karşıya kalırlar. Birkaç gün veya hafta içinde süspansiyon içinde organ kültürü sonra, karşı karşıya kültürler sabitlenmiş ve histolojik analiz için parafin içine gömülmüştür. kanser hücreleri ve normal doku arasında üç boyutlu etkileşimi, daha sonra hematoksilen-eozin ile ya da kalp dokusunda, epitoplar ya da karşı karşıya kanser hücreleri için immünohistokimyasal boyama sonrası lekelenmiş dizi bölgelerinin arasında yeniden yapılmıştır. Deney kanseri istilası kanser hücreleri ve komşu stromal ana elemanlarının (miyofibroblastlar, endoth arasındaki moleküler etkileşimlerin sonucu olduğu son kavramı ile tutarlıdırElial hücreler, hücre dışı matris bileşenleri, vs.). İşte, bu stromal ortamı yaşayan bir doku parçası olarak kanser hücrelerine sunulmaktadır. Testin alaka Destekleyici yönleri birden vardır. Ilerici işgal ve yedek zamanında ve ev sahibi dokusunun alanı ve invaziv ve karşı karşıya hücrelerin in vivo non-invaziv genel tahlilin sonucu ile ilişkilidir: tahlilde Invasion kanser işgali kriterlerine uygundur. Ayrıca, in vivo hücre istilası desen, patologlar tarafından tanımlanan deneyde histolojik görüntü yansıtılır. Çok sayıda potansiyel olarak anti-invasif organik konjener bileşiklerle elde edilen sonuçlar kantitatif yapı-aktivite ilişkisi (QSAR) analizi, klinikte kullanılan flavonoidler ve chalcone ve bilinen bir anti-metastatik ilaçlar için yapı-aktivite ilişkilerinin (örneğin, mikrotübül inhibitörleri çalışma izin ) ve deneyde istilasını inhibe eder. However, tahlil kanser işgali hesap immünolojik katkıları dikkate almaz.
Invasion kötü huylu tümörlerin özelliğidir. Bu aktivite, çevredeki dokuların tahrip olmasına yol açar, ama aynı zamanda metastaz oluşumunda rol oynadığı gösterilmiştir tesis edilir. Kanser hastalarının invazyon ve metastaz ve etkili anti-invaziv tedaviler ölmektedir beri hala tümör hücrelerinin işgali geliştirilmiştir taklit kıt, laboratuar deneyleri bulunmaktadır. Civciv, kalp deneyin amacı, üç boyutlu olarak tümör istilasını incelemek için ilgili bir organ kültür yöntemi sunmaktır. Tahlil invaziv ve non-invaziv hücreler arasında ayrım ve tümör işgali üzerine test bileşiklerinin etkilerini incelemek için izin verir.
tahlilin kullanımı arkasındaki mantık tümörler neoplastik hücreler sürekli olarak stroma (ev sahibi hücreler ve hücre-dışı matris) etkileşim ekosistemlerin olduğu gerçek bir kavramdır ve bu moleküler interaksiyonlarda işgali ile bu ince ayarlanmış 1 olduğu. Yani, deneyde tümör hücreleri Livi ile karşı karşıya kalırlarTümör hücreleri tarafından işgali için alt-tabakalar olarak değil, aynı zamanda stroma hücreleri ve matris elemanlarının farklı bir kaynağı olarak da iş görür ng civciv embriyosu kalp fragmanları 2. Civciv, kalp miyositleri, fibroblastlar ve endotel hücreleri içerir ve hücre dışı matris laminin, fibronektin ve kollajen farklı oluşmaktadır. Bu şekilde, üç boyutlu bir organ kültürü tekniği, hasta tümör istilası karıştığı bir çok selüler ve moleküler etkileşimleri kapsar.
civciv kalp testinin ana avantajı stromal etkilerin uygulamasıdır. Bu özellik, bazal membran 3 veya interstisyel matrisin 4 molekülleri oluşan cansız jeller halinde tümör hücrelerinin istilasını dayanmaktadır, in vitro olarak, diğer invazyon deneylerde daha tamamlanır. organ kültür deney bulunan tümör hücreleri ve normal yaşam konak doku arasındaki çatışma kavramı birkaç tarafından getirilmiştirAlmanya'da 7 Wolff ve Schneider Fransa'da 5, Birleşik Krallık 6 easty ve easty ve Schleich dahil yazarlar. Atıf yöntemler üzerinde civciv kalp işgali testinin iki teknik avantajları parçalarının hacmi kolaylıkla standardize olabilir ve organ kültürü sırasında fonksiyonel bütünlük izlenmesine olanak sağlar kasılma, kalmasıdır. Bunlar yumurta içindeki steril içeriğine kesilerek edilebilir, çünkü Ayrıca, kuş embriyolar, tercih edilir. tahlil tümör hücrelerine çevreleyen karmaşık stromal sunarak civciv chorioallantois membran tahlil 8 kavramsal benzerlik vardır.
Deney başarılı şekilde 9 ve HCT-8 (Kolon), 10 hücre çizgisi ailesine MCF-7 (meme) ile aynı insan tümörlerinden invaziv ve invazif olmayan hücre varyantları arasında ayırt etmek için uygulanmıştır. teknik, hem de potansiyel olarak anti-invasif bileşikleri test etmek için kullanışlıdır <sup> 11,12. Daha da açıklandığı üzere, küçük organik molekülleri yapı-aktivite ilişkileri kurulması için kullanılabilir. Deney Bununla birlikte, göz önüne kanser invazyonu immünolojik hücrelerin katkısını almaz. Bu tekniğin nedeniyle manipülasyonlar yüksek sayıda, tahlil çalışır sınırlı sayıda (en fazla 30 kültürler) ve uzun turn-around zaman (yaklaşık 1 ay) içinde, yüksek verimli bir analiz sistemi olarak kabul edilemez vurgulanmalıdır.
PHF'lerin hazırlanması sırasında, fragmanlar süspansiyon kalmak olmayabilir ama damar duvarına yapışır; Bu kültür ortamı hacmini arttırarak aşılabilir. PHF'lerin sayısı çok düşük olduğu ve boyutu çok büyük ise, kültür ortamının düşürür. Bir araya test hücrelerinin hatası sıcaklığında veya mikrobik enfeksiyona dalgalanmalara bağlı olabilir. Alternatif olarak, agrega bir yetersizlik hücrelerinin özgü bir özelliktir olabilir. PHF için agrega bağlanması sırasında, k?…
The authors have nothing to disclose.
We thank Marleen De Meulemeester for demonstrating the assay technique in the video film. B. I. R. is a Postdoctoral Research Fellow of the Research Foundation – Flanders (FWO – Vlaanderen). L.M.M. is a recipient of an Emmanuel van der Schueren grant from the Flemish League against Cancer (Vlaamse Liga tegen Kanker).
Ringer's salt solution | Braun | CEO123 | |
Bacto-agar | Becton Dickinson | 214010 | |
Tris-(hydroxymethyl)-aminomethaan Analar | VWR | 103157P | |
BSA : albumin from bovine serum, cohn V fract. | Sigma | A4503-500G | |
MEM-Rega 3 | Life Technologies | 19993013 | |
Gyrotory shakers | New Brunswick Scientific | G10 and G33 | |
Erlenmeyer flasks 50 ml | Novolab | 92717 | |
Glass Petri dishes | Novolab | 68516 | |
Iridectomy scissors | Rumex | 11-0625 | |
Macroscope with calibrated ocular grid | Wild | 157702 | |
Paraffin wax | International Medical products | 8599956 | |
Eosin Y | Sigma | 230251-25g | |
Harris' hematoxylin | Sigma | HHS32-1L | |
Coverslipping resin (Tissue-Tek) | Sakura | 4494 | |
Paraffin melting apparatus | GFL | 1052 | |
Microtome for paraffin sectioning | Reichert | ||
Stppers for Erlemeyer flasks with gas in- and outlets | Novolab | 2602421 and 260243 | |
Diaminobenzidine | Sigma | D8001 | |
REAX rocking table | Heidolph | 54131 | |
24-well tissue dishes | VWR | NUNC142475 | |
Ophtalmological enucleation spoon | Rumex | 16-060 | |
Sharp forceps | Rumex | 4-111T | |
Blunt forceps | Nickel-Electro LTD | 7112 | |
Erlenmeyer flasks 5 ml | Novolab | 211901 | |
Microscope slides washed and degreased | International Medical products | 8613908 |