Studium der Gaumen Entwicklung werden durch das Auftreten von Gaumenspalte, einem Geburtsfehler, die eine enorme gesundheitliche Belastung auferlegt und hinterlassen bleibende Entstellung motiviert. Wir zeigen hier eine Technik zur Kultur palatinalen Regalen, die verwendet werden können, um verschiedene Signalwege in palatinalen Entwicklung und Fusion studieren.
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Methodenartikel
Methode der Untersuchung Palatal Fusion mit statischen Organ Culture
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Lippen- und Gaumenspalte gehören zu den am häufigsten von allen Geburtsfehler. Die sekundären Gaumen Formen aus mesenchymalen Regale mit Epithel bedeckt, die die Mittellinie epithelialen Naht haftet (MES). Die Theorien besagen, dass MES-Zellen folgen eine epitheliale zu mesenchymale Transition (EMT), Apoptose und Migration, so dass ein fusioniertes Gaumen 1. Vollständigen Zerfall der MES ist die letzte wesentliche Phase der Gaumenzusammenfluss mit umliegenden mesenchymalen Zellen. Wir stellen ein Verfahren zum Gaumen Organkultur. Die in vitro-Protokoll entwickelt, ermöglicht die Erforschung der biologischen und molekularen Prozesse bei der Fusion. Die Anwendungen dieser Technik sind zahlreich, darunter Auswertung der Antworten auf exogene chemische Mittel, die Auswirkungen der regulatorischen und Wachstumsfaktoren und spezifische Proteine. Palatinalen Organkultur hat eine Reihe von Vorteilen, einschließlich Manipulation in unterschiedlichen Stadien der Entwicklung, die nicht mit in vivo-Studien ist möglich.
Einleitung
Gesichtsspalten sind die vorherrschenden kraniofaziale Missbildungen. Auch bei Berücksichtigung aller möglichen kraniofazialen Defekten, dies sind die zweithäufigste Geburt Anomalien bei Neugeborenen 2. Gaumenspalten bei ungefähr 1 in jeden 700 Geburten in den Vereinigten Staaten (US) jedes Jahr auftreten, ist die Inzidenz von Gaumenspalte gleich 475 Kinder mit Gaumenspalten pro Monat oder 15 Kinder mit Spalten pro Tag 3 geboren. Etwa 1% der Kinder geboren auf der ganzen Welt jedes Jahr weisen irgendeine Form von kraniofazialen Dysmorphien.
Klüften des Gaumens und der Lippen brauchen einen sehr teuren und kompliziert....
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Protokoll
Alle beschriebenen Verfahren muss in Übereinstimmung mit den Richtlinien und Vorschriften für den Einsatz von Wirbeltieren, einschließlich der vorherigen Genehmigung durch die lokalen Institutional Animal Care und Verwenden Ausschuss durchgeführt werden.
1. Herstellung von Dissecting Instrumente und Kultur Medien
- Vorwäsche alle Instrumente in Präparation mit 3% Wasserstoffperoxid und dann Autoklavieren bei 121 ° C für 20 Minuten verwendet werden. Filter BGJb Medien mit einer Antibiotika und Antimykotika-Lösung unter Verwendung eines 0,22 um Porengroße Filter mit Vakuumsauger in einer Haube.
2. H....
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Ergebnisse
Die Technik kann auf verschiedene Arten von experiments.The folgende Studie angewendet werden sollte die teratogene Wirkung von Nikotin in vitro an palatinalen Fusion zu testen. Zwei Mäusestämme wurden für dieses Experiment verwendet wurde CD1 und C57.Palatal Gewebes mit 0,06 und 6 mM Konzentrationen von Nikotin Hemisulfat behandelt. Es wurde beobachtet, dass palatalen Fusions Muster und Zeitpunkt wurden in den zwei unterschiedlichen Stämmen unterschiedlich. In CD1-Mäusen, Gaumen Regalen aus der Kontrollgruppe .......
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Diskussion
Das Protokoll in diesem Artikel stellt ein Verfahren zum Präparieren Gaumen Regalen von Embryonen im embryonalen Tag 13,5. Palatinalen Regalen aus Mausembryonen wurden in einem Serum-freien Kulturmedien in einer Atmosphäre von 95% O 2 5% CO 2 bei 37 ° C. Erfolgreiche palatinalen Dissektion ist kritisch abhängig von mehreren Faktoren in jedem Schritt während des Verfahrens aus dem embryonalen Zeit der Mäuse euthanasiert zu der Beendigung der Kultur. Einer der wichtigsten Faktoren für Gaumenfusion is.......
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Offenlegungen
Den Autoren stehen keine konkurrierenden finanziellen Interessen gegenüber.
Danksagungen
Die Autoren haben keine Danksagungen.
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| BGJb | Invitrogen | ||
| Penicillin/Streptomycin | Lonza Inc. | 17-602E | 100X |
| Petrischalen | VWR | 25384-088 | 100 x15 mm |
| Mittelschacht-Organkulturschale | Falcon | #353037 | 60 x15 mm |
| Dreieckiges Drahtgitter | Sonderanfertigung aus Edelstahldrahtgeflecht, um gut in die Organkulturschale zu passen. | ||
| Polycarbonat-Filter | GE& Wasser- und Prozesstechnologien | K04BP04700 | Schwarz 0,4 Mikron, 47 mm |
| Stereomikroskop | ZEISS Stemi SR | ||
| Kulturhaube | NUAIRE Laminar Flow | ||
| Mikrodisparierzange | Dumont Medical | #5 | |
| Mikrodisparierschere | Kent Scientific Corporation | INS14003-G | Vannas Schere, gerade, 8 cm lang, 0,1 mm Spitzen, 5 mm Klingen, in Deutschland hergestellte |
| Mikrodisparierschere | Kent Scientific Corporation | INS500086 | Vannas Schere, gerade, 8,5 cm lang, 0,025 mm x 0,015 mm Spitzen, 7 mm Klingen |
| Mikrodisparierschere | Kent Scientific Corporation | INS14127-G | Federschere gebogen gebogen, 10,5 cm lang, 8 mm Klingen, in Deutschland hergestellt |
| Chirurgische Currete (Löffelspatel) | Hu-friedy | CM 2/4 | |
| Protektor Laborhaube | Labconco | ||
| Inkubator | Thermo Scientific | Farma | |
| Series11 Wasserjacke | |||
| CO2 Inkubator | |||
| PBS | GIBCO | 10010-023 | 1-mal |
| Faseroptische Lichtquelle | Faser-Licht Dolan-Jenner | PL-750 | |
| Einbettkassette | Statlab | EC301 | |
| Kim Tücher | VWR | 470173-504 |
Referenzen
- Nawshad, A. Palatal seam disintegration to die or not to die that is no longer the question. Developmental dynamics an official publication of the American Association of Anatomists. 237, 2643-2656 (2008).
- Strong, E. B., Buckmiller, L. M.
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Nachdrucke und Genehmigungen
