Marginerende leverleukocyten vertonen unieke kenmerken en verschillende immunologische functies in vergelijking met andere leukocytenpopulaties. Hier beschrijven we een methode voor selectieve oogst van deze specifieke levercelpopulatie, door geforceerde perfusie van de lever van ratten of muizen. Marginerende leverleukocyten lijken cruciaal te zijn bij het bepalen van de vatbaarheid voor levergerelateerde ziekten en metastasen.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Selectief oogsten van Marginating-lever leukocyten
* These authors contributed equally
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Marginerende-hepatische (MH) leukocyten (leukocyten die zich hechten aan de sinusoïden van de lever) bleken een unieke samenstelling en kenmerken te vertonen in vergelijking met leukocyten van andere immuuncompartimenten. Concreet wijzen bewijzen op een duidelijk pro- en anti-inflammatoir profiel van de MH-leukecytenpopulatie en een hogere cytotoxiciteit van leverspecifieke NK-cellen (namelijk pitcellen) in vergelijking met circulerende of splenische immuuncellen bij zowel muizen als ratten. De hier gepresenteerde methode maakt selectieve oogst van MH-leukocyten mogelijk door geforceerde perfusie van de lever bij muizen en ratten. In tegenstelling tot andere methoden die worden gebruikt om lever-leukocyten te extraheren, waaronder weefselvermaling en biologische afbraak, levert deze methode uitsluitend leukocyten op uit de lever-sinusoïden, onverhoeld door cellen uit andere levercompartimenten. Bovendien behoudt de perfusietechniek de integriteit en het fysiologische milieu van MH-leukocyten beter, waardoor bekende fysiologische reacties op weefselverwerking worden gespaard. Aangezien veel circulerende kwaadaardige cellen en geïnfecteerde cellen worden vastgehouden tijdens het passeren door de lever-sinusoïden, fysiek interactie hebbend met endotheelcellen en residente leukocyten, is de unieke MH-leukecytenpopulatie strategisch gelegen om te interageren, identificeren en reageren op afwijkende circulerende cellen. Daarom kan selectieve oogst van MH-leukocyten en hun studie onder verschillende omstandigheden onze begrip van de biologische en klinische betekenis van MH-leukocyten bevorderen, specifiek met betrekking tot circulerende afwijkende cellen en levergerelateerde ziekten en kankermetastasen.
Inleiding
De lever sinusoïden bevatten talrijke leukocyt subtypen van verschillende immuun activiteiten kritisch voor het organisme. Zo worden marginating lever (MH) natural killer (NK) cellen, ook bekend als pitcelen kenmerk morfologisch als grote granulaire lymfocyten (LGLs) en functioneel als leukocyten spontane cytotoxische capaciteit dat hepatische weerstand tegen de vestiging van bloed- gedragen tumor uitzaaiingen. Het doel van de werkwijze die hierin wordt selectief oogsten van MH leukocyten, om deze belangrijke en unieke celpopulatie (en immuuncompartiment) bestuderen inschakelen en het effect van verschillende manipulaties (bijv immuunactivatie) de volgende s....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Ethiek Verklaring: Procedures waarbij proefdieren zijn goedgekeurd door de Institutional Animal Care en gebruik Comite (IACUC) goedgekeurd bij Tel Aviv University.
1. Ratten Protocol
- voorbereidingen
- Bereid gehepariniseerde oplossing PBS (30 eenheden / ml) bij kamertemperatuur (KT) te gebruiken door toevoeging van 30 eenheden conserveermiddel heparine per ml fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) 1x oplossing. Bereken 35 ml per dier.
- Pass gehepariniseerde PBS door de peristaltische pomp lijnen en de vlinder naalden om luchtbellen te verwijderen.
- Steriliseren chirurgische instrumenten - 2 scharen, for....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
In F344 ratten vergeleken we de cytotoxiciteit van MH-NK-cellen (vanuit de lever sinusoïden geforceerde leverperfusie) om cytotoxiciteit van de gehele lever celpopulatie na mechanisch malen van het leverweefsel, en de cytotoxiciteit van circulerende leukocyten. Alle celpreparaten werden ten minste 3 maal gewassen, zoals routine immunologische tests, en als doelwit cellijnen gebruikten we de allogene YAC-1 of syngene MADB106 doelwitcellijnen. Zoals aangegeven in figuren 1-.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
De lever perfusie methode die hierin maakt een selectief oogsten en het bestuderen van de unieke populatie van marginating lever leukocyten. Lever- NK-cellen, ook wel pit cellen 3, vormen een onderscheidende NK cel populatie die in de lever sinusoïden wonen. Ze zijn te vinden in ratten, muizen 17 en bij de mens 18,19. Vergeleken met geïsoleerde perifere NK cellen pitcelen aangetoond hogere cytotoxiciteit tegen YAC-1 en CC531s doelwitcellijnen 20, werden naar een groter aantal .......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
De auteurs en dit werk werden ondersteund door NIH/NCI-subsidie # R01CA172138 (aan SBE).
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Autoclud Peristaltic pump | |||
| Butterfly needle | OMG | 26 G | |
| Butterfly needle | OMG | 21 G*3/4" | |
| Syringe | Pic solution | 1 ml | |
| Syringe | Pic solution | 2.5 ml | |
| Syringe | Pic solution | 5 ml | |
| Syringe | Pic solution | 10 ml | |
| Syringe | Pic solution | 25 ml | |
| Blunted-edged forceps | |||
| Scissors | |||
| Hemostat | |||
| Tissue forceps | |||
| 22 W Fluorescent Daylight Magnifier Lamp |
Referenties
- Melamed, R., et al. The marginating-pulmonary immune compartment in rats: characteristics of continuous inflammation and activated NK cells. J Immunother. 33, 16-29 (2010).
- Benish, M., Melamed, R., Rosenne, E., Neeman, E., Sorski, L., Levi, B., Shaashua, L., Matzner, M., Ben-Eliyahu, S.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
